2015版中国药典微生物限度记录课件.ppt

培养基适用性试验 修订内容 控制菌检查用培养基数量减少 7 个，在增菌过程中， 使用无选择性增菌培养基。 理由： 污染菌受到环境、加工过程及储存等影响，受到损 伤，使用无选择性增菌培养基培养，使受损伤的 细胞得到修复，提高检出率。 31 培养基适用性检查 成品培养基、脱水培养基或按处方 配制的培养基的适用性检查 促生长能力、抑制能力和指示特性 的检查。 32 实验菌株的管理使用及鉴定 菌种的保藏 低温、干燥、缺氧、缺乏营养等环境条件都可以抑制微生物 的代谢和生长繁殖，因此，低温、干燥和真空是菌种保藏 的重要手段 。 33 菌液制备用培养基 菌株 培养基 培养温度（℃） 培养时间（ h ） 枯草芽孢杆菌 铜绿假单胞菌 金黄色葡萄球菌 白色念珠菌 黑曲霉 胰酪大豆胨琼脂 或胰酪大豆胨肉 汤。 沙氏葡萄糖琼脂 或沙氏葡萄糖肉 汤 沙氏葡萄糖琼脂 30-35 20-25 20-25 18-24h 2-3 天 5-7 天 ， 或 直 到 获得丰富的孢子 34 革兰染色 方法 涂片 — 干燥 — 固定 — 初染 — 媒染 — 脱色 — 复染 — 冲洗 — 滤 纸 — 干燥 — 显微镜观察 注： 1. 涂片以匀薄为佳，涂太厚影响镜检结果。 2. 复染：滴加番红染液 30s — 1min 。水洗，待干。 番红复染，增加脱色菌与背景的反差并区别于未脱色菌。 35 白色念珠菌 菌落形态： 球形，表面光滑， 呈乳白色。 显微镜下形态： 革兰阳性菌，有厚 膜孢子，假菌丝、 芽管，孢子长出短 小芽管。 36 金黄色葡萄球菌 菌落形态： 圆形凸起，呈金黄色， 边缘整齐，周围有黄色 环，表面光滑湿润。 革兰染色：紫色，革 兰氏阳性菌。 显微镜下形态：呈圆 形，葡萄状排列，无 芽孢、无鞭毛。 37 四、《 2015 版药典》制药用水检查法修订内容 定义 制药用水是药物生产用量大，使用广的 一种辅料，用于生产过程及药物制剂的 制备。 分类 根据使用的范围不同，分为饮用水、 纯化水、注射用水及灭菌注射用水。 制药用水的原水通常为饮用水。 38 纯化水质量标准修订 适用性试验 试验菌 铜绿假单胞菌 枯草芽孢杆菌 试验方法 照通则 1105 中计数培养基适用性检查法， 同胰酪胨大豆琼脂培养基 39 纯化水质量标准修订 修订前 取本品，采用薄膜过滤法处理后，依法检查，细 菌、霉菌和酵母菌总数每 1ml 不超过 100 个。 修订后 取本品不少于 1ml, 按薄膜过滤法处理后，采用 R2A 琼脂培养基， 30 — 35 ℃ 培养不少于 5 天，依 法检查， 需氧菌总数每 1ml 供试品中不得过 100cfu 。 40 2015 版《中国药典》微生物学 检验技术实施指导与修订解读 1 内容简介 一、 2015 年版《中国药典》微生物学检验的发展和修订 二、非无菌产品微生物检查：微生物计数法 ? . 修订依据 ? . 格式变化 ? . 适用范围 ④ . 环境要求 ⑤ . 微 生物技术方法的修订内容（ a. 方法适用性试验修订 b. 试 验方法的修订 c. 培养基体系的修订） 三、非无菌产品微生物检查：控制菌检查法 四、《 2015 版药典》制药用水检查法修订内容 五、微生物检验超标结果（ OOS ）情况的调查和处理 六、 2015 版《中国药典》无菌检查法 七、生物安全实验室要素 2 一、 2015 年版中国药典微生物学检验的发展和修订 ICH ：人用药物注册技术国际协调会 协调各国对药品注册所需的质量、安全性和疗效的 技术要求建立统一规范的质量技术要求，减少国 际间贸易的障碍。 PDG ：药典讨论组 1989 年，由欧洲药品质量管理局、美国药典委员会 和日本药局方的三方代表组成了 PDG 。 3 ( 一）修订后微生物限度检查法的特点 修订后的微生物限度检查法概念更明确、体例更合 理 修订前：一个通则：微生物限度检查法 修订后：三个通则： 非无菌产品微生物检查：微生物计数法 非无菌产品微生物检查：控制菌检查法 非无菌药品微生物限度标准 4 修订后的特点 概念明确，体例合理与国际接轨，兼顾了国情 1. 试验环境的要求 2. 菌种采用 CMCC 3. 检验量依照《中国药典》 2010 年版，主要工艺剂 型限制 4. 微生物限度标准 5. 控制菌检查：保留部分生化试验 6. 修订后，控制指标更合理，计数方法及标准合理、 准确，反映真实污染情况 5 2015 版药典微生物检查法修订内容——环境要求 目前我国药品微生物检测对环境的要求与国际标准 分级不一致。 国际要求：只要洁净环境分为 A 级、 B 级、 C 级、 D 级。 A （百级）、 B （千级）、 C （万级）、 D （十万级）。 协调案要求：试验在经过设计的可避免外来微生物 污染供试品的环境下进行。 我国修订后药品微生物限