精选牛人工授精技术.ppt

精子生存时间和生存指数的测定 精子生存时间：指精子在某温度下在体外的总的生存时间。 生存指数：将精液在某温度下，每隔8～12小时检查一次精子活力，直至无活动精子为止，相邻两次检查的平均活力与间隔时间的积之和为生存指数。 ;.; * PH测定 正常精液PH：　牛、羊　6.5～6.9、猪、马　7.4～7.5　 同种精液PH偏低的，品质较好，PH偏高的受精率、生活力和保存效果都显著降低。 ;.; * 美蓝褪色试验 ;.; * 精液稀释 稀释的目的 稀释液的成分及作用 稀释液的配制方法 稀释倍数的确定 稀释方法 ;.; * 稀释的目的 大精液容量，增加了一次采精量的可配母畜数。 延长精子存活时间。 有利于精液的保存和运输。 ;.; * 稀释液的成分及作用 稀释剂：单纯扩大容量的等渗液。0.9%NaCl、5%葡萄糖。 营养剂：主要提供营养，以补充精子在代谢过程中消耗营养。 （1）奶类：奶粉(脱脂、速溶)10—12%；鲜奶经消毒加入10—20ml。 （2）卵黄，通常加入20%。 （3）糖类，3%葡萄糖，11%蔗糖。 保护剂：主要保护精子免受各种不良外界环境因素的危害。 　　（1）非电解质或弱电解质：降低精液电解质浓度，常用糖类、氨基乙酸。 　　（2）缓冲物质：维持精液的PH，常用柠檬酸盐、酒石酸钾钠、磷酸二氢钾和三羟甲基氨基甲烷（tris)等。 　　（3）防冷物质：防止精子发生冷休克，常用卵黄、奶类。 　　（4）抗冻物质：甘油、二甲基亚砜(DMSO)。 　　（5）抗菌物质：青霉素、链霉素、氨基苯磺胺。 其他添加剂：激素类、维生素、酶类、染料类、有机酸、精氨酸等。 ;.; * 稀释液的配制要求 药物原料应选用化学纯和分析纯制剂。 用具须洗净消毒。 药品用蒸馏水溶解后，要进行过滤和水浴消毒。 蒸馏水要新鲜。 卵黄要取自新鲜鸡蛋。 最好现用现配，卵黄、奶类、抗生素现用现加。 ;.; * 稀释倍数的确定 一头公牛一次采得鲜精12毫升，经检查精子活力为0.7，密度为11亿/毫升，如为母牛输精时要求有效精子数不少于0.1亿，输精量为0.25毫升，本次采得的精液可为多少头母牛输精？ （1）每毫升原精液中有效精子数：11*0.7＝7.7亿/毫升 （2）稀释后每毫升精液中有效精子数：0.1/0.25＝0.4亿/毫升 （3）稀释倍数：7.7/0.4＝19.25　取19倍 （4）可配母牛头数：12*19/0.25＝912头 ;.; * 稀释方法 将精液精液与稀释液同处在30℃的环境中。 检查精液品质，确定稀释倍数。 稀释时，将稀释液沿着精液容器的壁慢慢加入精液中，同时慢慢转动精液瓶，使之混匀。 如需高倍稀释，应先做3—5倍的低倍稀释。 ;.; * 精液稀释 ;.; * 精液保存 常温保存：15—25℃ 低温保存：0—5 ℃ 冷冻保存：保存在液氮(-196℃)或干冰(-79℃) 中。 ;.; * 液氮及其容器 液氮的特性：超低温性、易挥发性、抑菌性。 利用液氮：防冻伤、防窒息、防爆炸 液氮罐： ;.; * 液氮罐的构造 ;.; * 液氮罐的使用 购买时要检查合格证，查看各部件是否齐备完好，测定液氮损耗率是否正常。 运输液氮要有专门的车辆，防止剧烈振荡。 贮存液氮要在专门的室内。 当液氮量达容积的1/3时要及时充氮。 每年要清洗保养一次 ;.; * 精液的冷冻保存原理 玻璃化假说：稀溶液在冰晶化温区（0～－60 ℃）易形成冰晶，冰晶为分子有序排列、形态规则、颗粒较大的固体，可对精子产生渗压和机械危害。如溶液快速降温，则形成分子无序排列、颗粒较小的玻璃化固体，对精子危害小，再以同样的方式升温，精子即会恢复活力。 ;.; * 细管冻精的生产程序 采精及精液品质检查 精液稀释：二次稀释法 降温平衡： 分装 冻结：液氮熏蒸浸泡法 抽样检查 ;.; * 12 100 12 100 牛人工授精技术 广西武宣金泰丰农业科技有限公司 ;.; * 人工授精的概念 种畜配种：自然交配、人工授精 人工授精是指利用器械采取公畜的精液，经过适当的检查和处理，再用器械把精液输送到母畜生殖道的适当部位，使之受孕的配种方法。 ;.; * 人工授精的发展 试验阶段： 1780年意大利生理学专家司拜伦谨尼（Spallanzani）第一次进行狗的人工授精。20世纪初对马试验成功。 实用阶段：在20世纪30年代形成了一套较完整的操作方法。40～60年代，欧洲多数国家，北美、大洋洲国家及日本人工授精已相当普及。 冷冻精液阶段： 　　出现：1949年英国波芝（Polge）对鸡精液冷冻成功。 　　发展：1950年英国的史密斯（Smith）和波芝研究开发了牛精液冷冻保存技术。1960年后冷冻精液的人工授精技术广泛展开。我国的人工授精技术始于50年代（猪），但精液冷冻技术70年代才得以推广。