传代细的胞培养实验.ppt

传代细胞培养实验 费晓方 实验目的和要求 ■掌握无菌操作技术 了解传代细胞的培养的一般方法与步骤。 ■了解培养细胞的消化分散。 了解培养液配制方法。 ■了解倒置显微镜的使用。 为什么要学习翔底锦2 口3 实验原理: 细胞培养是将机体内的某组织取出,分散成单 细胞,在人工条件下培养使其生存并不断生长 繁殖的方法。借助这种方法可以观察细胞的分 裂繁殖、细胞的接触抑制、以及细胞的衰老, 死亡等生命现象。还可以利用培养细胞制备染 色体,分析外界因素(如理化因素)对细胞的 影响,研究细胞癌变等等。在细胞培养的基础 上发展了细胞融合、细胞杂交等细胞工程技术 及单克隆抗体技术 ■动物细胞培养可分为原代培养和传代培养 直接从有机体获取的细胞进行的培养是原代培 养,若将培养细胞洗脱后转移到另外的容器中 进行在培养叫做传代培养 ■目前,动物细胞培养技术已经达到一个新的 阶段:从不同分化组织衍生得到的许多类型的 细胞能够成功地在培养液中生长、反复传代 在维持一个独特细胞系长达数月的过程中,记 录下细胞的倍增次数和生长速率是很有用的, 以便在合适的时间传代以及在体外生活是中不 同时间冻存细胞。 实验内容: 1.工作环境及表面的处理(超净台的使用) *早期细胞培养,依靠的是精湛的操作技术和尽可能的靠 近火焰一达到细胞的无菌化。 *目前,超净台是使工作台无菌化最经济有效的手段 (1)超净台的选择,应选择层流超净台。不能选择平流 超净台。超净台应该尽可能的安装紫外灯 (2)超净台的维护,超净台的HEPA过滤层应该每一年 或一年后由认可的机构进行维修。 (3)使用超净台的方法,在每次使用前,应用紫外 灯照30分钟。首先打开吹风的开关,在关掉紫外 灯,打开日光灯。点燃酒精灯,开始操作。 (4)超净台表面的处理。 a.应做到每日清洁,以使操作中溅出的培养液或其 它液体及时被清除而不蓄积,达到杜绝细菌和真 菌繁殖的目的。 b.工作台中只限放置每日工作所必需的物品,其他 非必须物应当除去 c.日常的清洁工作包括:用70%的酒精或10%的 新洁而灭擦洗工作台。用固定的容器装废弃液。 2细胞培养所用玻璃及塑料制品的处理 ■用于细胞培养的器材包括:细胞培养瓶, 细胞培养板,吸管,各种瓶子等。 目前,上述器材均可以从商家买到无菌 次性的用品。但是,成本太高。 玻璃器材,经过湿热或者干热灭菌后可以 反复使用。 ■不宜进行高温高压灭菌的器材,可以浸泡 在70%乙醇中进行消毒,并在超净台上 吹干。 3实验者的操作技术 ■无菌操作的原则:保证细胞培养板,细胞培养皿 细胞培养瓶内部以及吸管包裹层等内部的无菌状态 ■细胞培养应在超净工作台或有空气滤过装置的工作 间里进行 培养液或其它溶液不应该在工作区以外打开。 装吸管或吸头的容器也不应该在工作区以外打开。 细胞培养中液体的吸取,均需机械移液装置移取 切勿采用口吸的方法。口吸是最大的微生物污染源, 更重要的是细胞培养液及成分通过食入或吸入的方 式及入人体,可能对研究人员造成伤害 ■细胞培养瓶在超净台中打开后,瓶盖应扣在工作台 上