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分光光度法 第五章 分光光度法 药物分析课件 第五章 分光光度法 考试大纲要求 ? 掌握紫外 — 可见分光光度法的基本原理和测定方 法以及在药物鉴别、检查和含量测定中的应用。 ? 熟悉仪器的校正和检定方法及紫外吸收光谱与物 质结构的关系。 ? 熟悉红外分光光度法的基本原理以及在药物鉴别、 检查中的应用。 ? 了解紫外分光光度计、荧光光度计和红外光谱仪 的基本结构。 ? 了解荧光分析法的基本原理和应用。 一、紫外 — 可见分光光度法 1 ．原理 ? 当物质分子吸收一定波长的光能，分子外层电子 或分子轨道电子由基态跃迁到激发态，产生的吸 收光谱一般在紫外 – 可见光区，称为紫外 – 可见光 谱 (ultraviolet/visible spectrum, UV/VIS ) 。 ? 紫外 – 可见光谱为一种分子吸收光谱，吸收波长在 200 ～ 760 nm 范围内。 波长范围： 200 ～ 400nm 称为紫外光区， 400 ～ 760nm 称为可见光区。 光谱产生：是由分子外层价电子跃迁产生的。条件 是所提供的辐射能量恰好满足该吸收物质两能级间跃 迁所需的能量。 定量基础： Lambert-Beer 定律 ECL I I T A ? ? ? ? ? 0 lg lg 式中 A 为吸收度， T 为透光率， C 为溶液浓度， L 为液层厚度， E 为吸收系数 1% cm 1 E ）。 2 ．仪器 基本组成： 光源 → 单色器 → 吸收池 → 检测器 → 数 据记录和处理 ? 波长校正：常以汞灯中几根较强谱线或用氘灯 的特定谱线为参照进行校正。 ? 吸收度检定：用 K 2 Cr 2 O 7 的 H 2 SO 4 溶液进行检定， 在规定波长处测吸收度。计算与规定值比较， 相对偏差应在± 1% 以内。 ? 杂散光检查：配制一定浓度的 NaI 和 NaNO 2 溶 液，在杂散光影响较显著的波长处测定透光率， 不得大于规定值。 3 ．吸收光谱与物质结构的关系 ? 光谱的特征参数： λmax 、 λmin 、 λmax 处的 吸收系数、末端吸收。 表 5-1 电子跃迁的类型 跃迁类型 波长（ nm ） 吸收强度 对应结构 σ→σ* 跃迁 <200 饱和脂肪键 n→σ* 跃迁 ～ 200 弱～中等吸 收 含－ OH 、－ NH 2 、 － X 、－ S 等结构 π→π* 跃迁 ～ 200 强吸收 孤立双键、共轭双 键 n→π* 跃迁 200 ～ 400 弱吸收 含杂原子的不饱和 基团 C=O 、 C=S 、－ N=N －等 4 ．应用 ? ChP 对吸收度测定要求 : (1) 对溶剂的要求 (2) 空白对照试验 (3) 测定波长确证（在规定的± 2nm 以内） (4) 供试品溶液的浓度（使 A 在 0.3 ～ 0.7 ） (5) 仪器的狭缝宽度 UV-ViS 的应用 ? 鉴别 : 对比吸收光谱特征参数 : 核对供试品溶液的 λmax 、Ｅ、 A 是否符合规定。如盐酸氯丙嗪的鉴 别。 比较吸收度比值的一致性 : 吸收峰较多时，可 规定几个波长处的吸收度比值作为鉴别标准。如 两性霉素 B 的鉴别。 对比吸收光谱的一致性 : 与对照品溶液比较。 如已烯雌酚注射液的鉴别。 杂质检查 ? 在某波长处 , 杂质有最大吸收 , 而药物几乎 无吸收。如地蒽酚中二羟基蒽醌的检查、 肾上腺素中肾上腺酮的检查等。 在某波长处，药物有吸收，而杂质吸收 弱或无吸收。如头孢噻吩钠中噻吩乙酸的 检查。 含量测定 对照品比较法 A 1 /A 2 = C 1 /C 2 吸收系数法 A = E C L 计算分光光度法 二、荧光分析法 ? 1 ．原理 荧光 （ fluorescence ） 当物质分子吸收了一定波长的紫外光能之后， 基态电子跃迁到第一激发态，处于激发态的电子 首先以无辐射的方式下降到第一激发态的低能级， 而后再回到基态时，所发射出的光称为荧光。由 此可见，荧光是一种以光能为激发源的发射光， 且波长比激发光波长更长，一般处于可见光区。 荧光现象是物质的属性之一，并非能吸收激发光 的物质都能产生荧光现象。 ? 激发光谱 是荧光强度对激发波长的关系曲 线。 ? 发射光谱 也称荧光光谱，是荧光强度对发 射波长的关系曲线。 ? 荧光光谱的形状与激发波长无关。荧光光 谱与激发光谱存在镜像对称“关系”。 ? 定量依据 当激发光的波长、强度、测定用 溶剂、温度等条件一定时，物质在低浓度 范围内的荧光强度与溶液中该物质的浓度 成正比。 3 ．应用 ? 鉴别 利用药物显荧光的特点进行鉴别，如 马来酸麦角新碱的鉴别 利用药物本身无荧光，但处理后显荧 光的性质进行鉴别，如 VB 1 的鉴别 ? 含量测定 对照品比较法，如地高辛片的含 量测定 三、红外分光光度法 ? 1 ．原理 ?