植物组织培养 植物组培生产技术应用 葡萄组织培养技术-项目介绍.pptx

菊花的组织培养与快繁技术;教学终极目标; 菊花是菊科菊属的多年生宿根草本植物,是我国的传统名花和世界四大切花之一 长期以来菊花采用分株、扦插等无性繁殖方法进行繁殖,但是传统的繁殖方法易受环境影响,繁殖周期长,随着市场需求的急剧增加,已经不能满足市场日益发展的需要。 植物组织培养具有增殖效率高、繁殖速度快的特点,可以用较短的时间和较少的空间生产出大量的试管苗;矮缩类病毒;;;;（一）材料选择和消毒 在温室中选取生长健壮的菊花，剪下其茎尖段，放入无菌容器内封口。用清水反复冲洗4～5 次，将洗净的材料放到75 %的酒精溶液中浸泡30s。然后用蒸馏水洗净，再将材料放入10 %的漂白粉滤液消毒8 min，再用无菌水冲洗3～5 次，滤纸吸干。再将材料转入0.1 %升汞溶液消毒，不低于5 min，最后用无菌水冲洗3～5 次，滤纸吸干。最后将材料放入无菌的三角瓶中封口待用。;（二）脱毒苗培养 在超净工作台上将灭过菌的材料放入无菌培养皿中，用解剖针剥去可见的生长点，周围可见的小叶在解剖镜下只剩下1～2 个叶原基，取下只有0. 2～0. 3 mm 生长点，放入提前做好的培养基中培养。 ; 然后将装有材料的培养基放入光照箱中进行培养。要求在黑暗或散射光下培养，温度28 ℃。待培养外植体出现愈伤组织后更换培养基，对其进行继代培养。 并在光照灯下补充光照，光照强度1000～4000 Lx ，温度23～25 ℃。待出芽后将其转入到另外的生根培养基中促使生根。;（三）脱毒鉴定 采用病毒的汁液感染法，由受检植株上取下叶片，置于等容积(W/ V) 的缓冲液(0.1 mol/ L 磷酸钠) 中，用研钵体和研杆将叶片研碎。 在指示植物(一般采用万寿菊) 的叶片上滴上此溶液，观察1 周后得到结果。并统计脱毒率。;（四）移栽 幼苗移栽前先炼苗2～3 d，即移栽前先把培养基瓶的塞子打开，放在25 ℃左右的温室中，增加组培苗对外界环境的适应能力。移栽时仔细洗去附着在幼苗上的培养基，然后移植于适宜的基质中，浇足定根水，盖上薄膜保持温度，避免阳光直射，并注意通风换气，温度控制在18～20 ℃。1～2 周后揭掉薄膜，每隔3～5 d叶面喷施营养液，1 个月即可上盆或定植于田间。; 菊花的组培快繁 （一）外植体材料选择与灭菌 选取在脱毒实验中成功移栽上盆而且长势健壮的植株作为外植体母株，以培养出大量的无病植株。 在外植体的选择上，可以选取生长健壮嫩茎和叶片作为材料。流水洗去表面灰尘，在超净工作台用75 %酒精处理20～30 s，再用无菌水冲洗3～5 次，转入0.1 %升汞溶液浸泡7～10 min，再用无菌水冲洗4～6 次，用滤纸吸干水分。;（二）诱导、继代培养 在无菌条件下，用剪刀将外植体茎段切成0. 5～1 cm 长小段，水平放置接种；叶片切成5mm×5mm小块，下表皮朝下水平放置接入初代培养基中，接种完成后即转入培养室进行初代培养，培养温度22～28 ℃，光强1000～4000 Lx。;1.间接再生途径 茎段和叶片接种到培养基上，均可以从一周内，明显可以看到茎段和叶片开始膨大。20d后产生愈伤组织，30d愈伤组织分化出芽。 2.直接再生途径 茎段和叶片接种到培养基上，均可以从一周内，明显可以看到茎段和叶片开始膨大。但是20d后不产生愈伤组织，直接分化出芽。;菊花再生植株;（三）生根、移栽 当培养基中的植株出芽后，再将其转入到生根培养基中，诱导其生根。或通过无根嫩茎扦插生根。 ;1.试管生根 切取3cm左右无根嫩茎，转插到1/2MS+NAA0.1培养基中，经两周即可生根，然后移栽驯化。移栽初期保持高湿度条件，营养钵基质浇透水，取出生根的试管苗，洗掉附加在根部的培养基，用竹签在基质上打一小孔，将幼苗插入基质中。然后家设小拱棚以保湿，随着幼苗的生长，逐渐降低空气湿度和基质含水量，转为正常的管理阶段。;2.扦插生根 利用菊花无根嫩茎易于生根的特点，也可免去试管生根这道程序。剪取2～3cm无根苗，插植到珍珠岩或蛭石的基质中，基质事先用生根激素溶液浸透，10d后生根率可达95%～100%。;;如何检测脱毒苗脱毒率（效果）？ 一、直接检测法 看植株的茎叶是否有该病毒所有的可见症状侵染后的病株表现为局部或系统花叶、皱缩、卷叶、黄化，老叶上出现紫色边缘的褪绿斑，也有沿叶脉形成紫色羽状班驳的，在春秋季比较明显。病株较脱毒苗生长势减弱，有矮化或畸形等症状。;草莓无病毒苗;（二）生物鉴定法 1.敏感（指示）植物的概念 有些植物对病毒极为敏感，一旦感染病毒就会在其叶