放射性核素标标记化学物.ppt

基本概念 放射性核素的选择 1要不改变原化学物的理化和生物学特 性;2要与化学物结合牢固稳定;3要有 合适的物理半衰期;4射线容易测量 5其它要求 几个重要参数 放射性浓度;2放化纯度;3放射性 比活度 、同位素与非同位素标记 四、定位标记与非定位标记 二放射性核素标记化合物制备方法简述 l放射性核素标记物制备技术的特点 a原料;b标记物的稳定性;c超微量技术;d进行冷试验; 2常用的基本方法 a同位交换法;b化学合成法;c生物合成法 放射性碘标记化合物的制备 四放射性碘制备分析试剂以125应用最广,现90%的 放免试剂盒中的示踪剂都是用125标记的,因为1251 具有二个重要的优点,用12标记的化合物有足够 的稳定性 1碘的同位素及125的特性 碘的同位素有29种,其中23种是放射性同 位素,它们具有很不同的物理特性,制 备分析试剂以125应用最广,因为25具 有二个重要的优点,一是半衰期(60天) 允许标记化合物可贮存应用一段时间; 是它只发射28Kev能量的x射线和5Kev 的γ射线,无β粒子,因而辐射自分解少 标记化合物有足够的稳定性 碘的同位素特性表 表6-7碘的同位素 核素半期射线主要生产方式 123 I13.0小时EC 121Sb(a,2n2) 12414.2天EC,B+121sb(a,n) 5I 60天 EC 124Xe(n,Y)125XeEC FI 天然丰度为100% 120I1.9×107年B,Y裂变产物 13118.04天B-,y130(n,y)131eB 13212.3小时B-,Y132e的子体 2蛋白质、多肽的15标记技术 蛋白质、多肽碘化的基本反应式 1,蛋白质、多肽碘化的基本反应式 yCH. CHCOOH+421s →H0 CH, CHCOOH 上式表示通过氧化剂使碘化物(1251)氧化成碘分子 2)与蛋白质 分子中的酪氨酸残基发生碘化作用,所以只要含有酪氨酸的化学物或人 工地接上酪氨酸基团的化合物都可用放射性碘标记。蛋白质分子中除含 酪氨酸外,还有组氨酸和色氨酸残基,有时也可生成碘化物,但 反应性远不及酪氨酸,因此影响蛋白质碘化效率的因素,主要取决于蛋 白质分子中酪氨酸残基的数量及其在分子中的暴露程度 方面,碘 化物的用量、反应条件(PH、温度、反应时间等)及氧化剂的性质等 也有影响 3常用标记方法 (1)氯胺-T法 2)乳过氧化物酶法 (3)联接标记法 (4)固相氧化法 1)氯胺T法 氯胺①法具有标记效率高、重复性好 试剂便宜易得、是目前应用最多的标记 方法。氯胺-T( Chloramine-T)是一种温 和的氧化剂,它的化学名是N一氯代对 苯磺酰胺钠盐,在水溶液中产生次氯酸 可使碘阴离子氧化成碘分子,反应式如 c98+0: CH3--SO. NHa+ NaCI +2NaOH+1212 氯胺_法的标记过程以吐为例 在反应试管中依次加入 GH 50ug 125I mci 50p Ch-T100μg50ul室温反应1分钟 SM 200ug 100ul 1%KI lmg 100ul 标记反应完成后用凝胶过滤等方法将125IGH 与游离的125离子分离。 在标记过程中应注意以下几个问题 氯胺-T水溶液遇光或暴露至空气中很不稳定,需要在临用时配制 b氯胺T的用量,按氧化2mCi无载体的Na2只需要015吧,而实际需要量大大 超过此值,经验认为用2mCi新鲜无载体125时,ChT用量约为100g。如用量 过大,会明显降低标记化学物的免疫活性和生物活性,用量不足又降低标记 率,甚至标记不 此外如碘溶液中含有保护剂(一般用Na2SO3等还原 剂),因它需要消耗Ch-T,固用量就需要相应加大。 c加入Ch-T后必须迅速混匀,以防止标记不均匀,在0~240C下,加入ChT后的 反应时间一般为一分钟左右,但也有延长至10分钟的 d加入偏重亚硫酸钠(SM)终止碘化反应,SM的用量一般为ChT量的1.2~1.5 倍就足够 e反应体积要小,使微量的蛋白质保持高浓度,才能保证一定的碘化效率,含 中等量酪氯酸的蛋白质其浓度为300mg/m时,碘化效率一般为80~90% 而如含50mg/ml时,则碘化效率可降至60~70% PH对碘化效率的影响:碘化反应最适的PH依据蛋白质的性质而定,一般蛋白 质所需的PH为7.3~7.8,通常Na12溶液中都含有相当量的NaOH(可高达 0.IM),因此所用的缓冲液必须具有足够的缓冲容量,如常用0.2~0.5M磷 酸盐缓冲液。 2)乳过氧化物酶法 利用乳过氧化物酶(LPO)有促进微量过氧化氢对11-的氧化作 用,生成12I+并标记在蛋白质酪胺酸分子上。标记方法如下:在 反应试管中依次加 蛋白质10g50μd Na 251 1-2mCi 50ul LPO 0~100ng50