植物转基因方法及特点与与转基因沉默现象.pptVIP

专题锦座 植物转基因方法及特点和转基因沉默现象 原文刊登于安徽技术师范学院学报2003年第1期 崔广荣  1植物的遗传转化方法及特点 ●植物基因工程研究中的关键步骤之一是通过特 定的方法 体植物细胞内 之发生定向的、永久性的遗传变异,即所 植物遗传转化( enetic transformation)为 方便有效地将外源基因导入植物体内,人们不 断地探索、发展新的植物遗传转化方法。目前 发展较为成熟的方法有农杆菌介导法、基因 法、电击法、PEG法、花粉管通道法、微注 其中基因枪法和农杆菌介导法 是最为有效的两种方法。  1.1基因枪法 ●基因枪法( particle gun bombardment microprojectile bombartment; biolistics 是1987年由美国康奈尔大学的 Sanford提 出的一种直接基因导入法,它避开了原 生质体再生植株培养的困难和当时人们 认为的所谓的农杆菌的宿主限制问题 这种方法是籍高速运动的金属粒将附着 于其表面的核酸分子引入受体细胞,然 后通过组织培养再生出完整植株。  由于基因枪法导入外源基因的技术本质上 种物理过程,因此它具有不用原生质 体再生培养、受体材料来源广泛、不受基 因型限制、缩短了获得转基因植株的周期、 获得的转基因植株变异率低、通常具有正 常的育性等优点。特别是在单子叶禾本科 植物中得到了较为广泛的应用。但是基因 枪法也有自身的缺点:转化效率不高,大 多在0.1-1.0%的范围内,难以选择;外源基 因序列常是多拷贝插入,从而导致基因汐 默;转入的基因有时是呈非孟德尔遗传; 费用较高等4  2PEG法 ●PEG法是一种通过化学物质PEG(聚乙二醇) 处理去壁的原生质体作为转化受体,改变细 胞膜的通透性而使原生质体获得转化。 Krens 等首次通过此法在烟草中获得成功。此后许 多人在双子叶和单子叶植物如烟草、矮牵牛 水稻、玉米等都获得了成功。由于PEG法的实 验成本低廉、结果也较稳定、重复性好、无 需特殊的仪器设备等特点,因而在发明起初 也成为应用较为广泛的方法。但是此法具有 明显的缺点:原生质体培养再生难度较大 受基因型限制:原生质体再生培养的转化植 株变异率高,易产生白化苗;转化率低1  1.3显微注射法、电击法及激光法 ●显微注射法( microinjection)是用显微注射器 将遗传物质注射到培养细胞中,通过组织培 养最终获得转化植株。此项技术起初主要应 用于动物,八十年代中期开始应用于植物的 遗传转化。虽然该法具有DNA注射的准确性 预见性、克服远源杂交的困难等优点,但其 又有工作效率低、表达不稳定等缺点,故其 应用受到了限制。自基因枪法诞生以来,这 种转化方法在植物上的应用走入了低谷2。  电击法( electroporation)是八十年代初发展起来的 种转化技术,首先在原生质体上运用此法将CAT 基因(氯霉素乙酰转移酶基因)转移到烟草、胡萝 玉米等植物的原生质体中并得以表达2。此法 的主要原理是在高压脉冲条件下,细胞膜上会出现 瞬时可逆性开放小孔,为外源物质提供了通道,籍 此导入DNA等遗传物质,达到转化的 激光 法同电击法类似,一定波长的激光聚焦后直径达 0.3~0.5微米时,高能量的激光束可引起细胞膜的可 逆性穿孔,短时间内又可自动修复,因而可利用激 光束将外源DNA导入到细胞中。 Weber等利用此法 将荧光素酶基因导入油菜叶绿体中, Toper转化烟 草、中国的傅荣昭等转化小麦均获得成功凹。激光 法和电击法均可用于双子叶和单子叶植物,转化受 体材料广泛。但这种方法的效率低是显而易见的 使用范围小,存在问题较多,发展缓慢  1.4花粉管通道法 ●花粉管通道法( pollen-tube pathway)又称子房 注射法( overy injection),是将外源DNA注入 到子房中轴的胎座位置,经形成的花粉管胚囊, 转化受精卵或胚细胞。这是一种在整体水平上 的转化方法,可使外源基因转移的操作直接在 栽培作物上进行,免除了细胞和组织培养程序, 并可直接获得转化的种子,开创了整株活体基 因转化的新途径。这种方法是中国科学院上海 植物生理研究所周光宇等在长期的科学研究中 建立和发展起来的。不过这种方法看似简单但 操作要求极为严格图。  1.5农杆菌介导法 ●科学家们经过长期的研究发现,农杆菌中存在 种环状的、大小约150~200kb的质粒( tumor inducing plasmid,简称为T质粒入,植物肿瘤即 是有T质粒上的一段DNA引起的,它通