绿色荧光蛋白基因克隆及表达 结题报告.pptVIP

绿色荧光蛋白基因 克隆及表达 PART 01 研究背景 GFP的应用主要集中在利用其荧光性 质的基础上作为一种标记物 GFP近几年得到了广泛的应用与发展 成为各研究领域的宠儿,但由于基础 理论研究远不及应用硏究因而其存 在着一些问题与不足。 研究绿色荧光蛋白(GFP)基因的基因 克隆及在大肠杄菌中的表达。通过质 粒重组形成所需要的重组质粒pET 28a-GF将重组质粒导入大肠杆菌体 内通过酶切、PCR及用IPTG诱导检测 是否在大肠杆菌体內诱导表达成功。 根据电泳结果及荧光现象得出结论 重组质粒在大肠杄菌体內成功诱导表 达 PART 02 实验技术路线图 质粒 PEGFP 质粒 提取 PEGFP N3 菌株 醋酸铵法 电涂检测检测 合格 培养 质粒 DH5a PET PET 28a 28a GFP 切胶回收 GFP 连接 醋酸钠沉 淀法回收 28a 抗性筛选 转 DH5a 化 质粒 感受态细 菌落PCR鉴定 PET-28-GFP 胞 酶切鉴定 重组质粒 化 得到发光的 诱导表达 BL GFP蛋白 检测 PET-28-GFP PART 03 实验材料和方法 实验材料 耗材:5m塑料离心管20个,塑料离心管架(30孔)1个,10、100、 1000μL微量加样器各一支,三角瓶300m一个,100m一个及塑料滴 管1个微型瞬间离心管加样器及吸头,经高压灭菌的 Eppen