血涂片制备与染色PPT课件.ppt

不良血涂片 * 4.标记 涂片干燥后用铅笔在血涂片的头 部写上姓名和编号 李四123 * 5.血涂片染色 勿冲洗再加瑞氏染色Ⅱ液5-8滴后将Ⅰ液和Ⅱ液充分混匀静置10分钟 直接流水冲洗至无浮色 （切勿先倒掉染液） 涂片经水洗干燥后用油镜 分类计数100个白细胞 李四123 涂片干燥后加瑞氏染色Ⅰ液5-8滴覆盖整个血膜1分钟 * [瑞氏染色原理] 细胞的染色既有物理的吸附作用，又有化学的亲和作用，各种细胞成分化学性质不同，对各种染料的亲和力也不一样。因此，用本染料液染色后，在同一血片上，可以看到各种不同的色彩，例如血红蛋白，嗜酸性颗粒为碱性蛋白质，与酸性染料伊红结果，染粉红色，称为嗜酸性物质；细胞核蛋白和淋巴细胞胞浆为酸性，与碱性染料美蓝或天青结合，染紫蓝色，称为嗜碱性物质；中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合，染淡紫色，称为中性物质。 * 图 瑞氏染色原理示意图 * 瑞氏-吉姆萨染色 【原理】 将瑞特染料和吉姆萨染料按一定比例混合后对细胞进行染色，其染色原理同瑞特和吉姆萨染色法，但染色效果更佳，因为其综合了瑞士和吉姆萨染色法的优点。 * 【方法学评价】 瑞氏染液和吉姆萨染液对细胞进行染色时有各自的显色特征，前者对细胞质和颗粒着色较好，后者对细胞核结构显示清晰。因此将二者结合，能取长补短、集中优势，用该混合染液对血细胞进行染色，其细胞核、细胞质和细胞内颗粒均着色鲜艳，对比鲜明。瑞氏-吉姆萨混合染色法是临床上广泛使用的方法。 * 染色步骤 A、待涂片在空气中完全干燥后，滴加数滴Wright’s染液盖满血膜为止，染色1 min。 B、滴加等量或稍多的缓冲液，混匀，染色5-10分钟。 C、用流水冲去染液，吸水纸吸干，镜检。 * 【质量控制】 血膜要干透后才能染色，否则染色时易脱落. 染色时间与染液浓度、室温及细胞多少有关，一般染液淡、染色时间长些效果好。 染液不能过少，以防蒸发沉淀。 冲洗时不能先倒掉染液，应以流水冲，防止染料 沉着。冲洗时间也不能长。 染色过淡，可复染。 染色过深可用水冲洗或浸泡，还可用甲醇脱色。 * 【染色结果评价】 正常情况：血膜外观呈淡琥珀色。在显微镜下红细胞染成粉红色，在厚薄均匀处略有碟状感。白细胞胞质中的颗粒能显示出各种细胞的特有色彩，细胞核染紫红色，核染色质结构清楚。 染色环境偏酸：则红细胞和嗜酸性颗粒偏红，白细胞核呈浅蓝色或不着色，染色过酸pH3.5时，则呈现一片红色，白细胞中除嗜酸性颗粒外均不着色。 染色环境偏碱：则所有细胞呈灰蓝色，微偏碱者红细胞暗红、白细胞颗粒深暗。嗜酸性颗粒可染成暗褐色甚至黑紫色或蓝色。中性颗粒也偏粗染成紫黑色，血膜过厚的地方呈绿色。 * 6.血涂片的观察 低倍镜观察 1.染色情况(满意、偏酸、偏碱） 2.细胞分布情况 油镜下分类计数：体尾交界处。 油镜分类时应按一定走向，不要重复计数。（共计数100个白细胞） 李四123 * 体尾交界处 理想区域 细胞重叠 细胞太稀 理想区域 * 各类成熟白细胞的形态学： 中性粒细胞（Ne）：在瑞氏染色血涂片上呈圆形，直径10～13μm，胞浆染粉红色，核形一叶（杆状核）至五叶不等，以三叶者多见，染成深紫红色，胞浆中有许多细小均匀紫红色颗粒。 * 嗜酸性粒细胞（Eo）：较中性粒细胞稍大，胞核多为两叶，呈眼镜、八字形，核染色质粗糙染深紫红色，胞浆内充满粗大均匀的嗜酸性颗粒，瑞氏染色时呈桔红色，有折光性。 * 嗜碱性粒细胞（Ba）：胞浆中含有大小不等的嗜碱性颗粒，瑞氏染色时呈兰黑色。于光学显微镜下常见胞浆中有小空泡，乃因嗜碱性颗粒易溶于水或因功能活动而脱颗粒所致；核呈淡紫红色常看不清，呈杆状或分叶状。 * 淋巴细胞（Ly）：胞体呈圆形，直径介于6～15μm之间，在成人血涂片中以小淋巴细胞为多见，直径6～9μm，核大呈深紫色致密而浓染，胞浆量极少；大淋巴细胞胞浆量较多，呈清澈的淡蓝色，可见少量嗜苯胺蓝颗粒，胞核圆或椭圆，常偏向细胞一侧，染色较深。 * 单核细胞（Mo）：在瑞氏染色涂片上为12～20μm，胞体圆形、椭圆形或不规则形；核形多种多样，最重要的特点是染色质较细致疏松，呈丝网状或条缕状，着色较淡胞浆较多，淡兰色，含大量细小尘土样颗粒。 * 中性粒细胞 嗜酸性粒细胞 淋巴细胞 嗜碱性粒细胞（右） 单核细胞 血小板 * 谢谢！ * * * * * * * 血涂片制备与染色 * 【目的】 掌握血涂片的制备和染色方法。 【原理】 将一小滴血液均匀涂在玻片上，呈单层紧密分布，制成薄血片。用含天青B和伊红的Romannowsky类染料进行染色。