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多肽合成技术 精品资料 多肽化学已经走过了一百多年的光辉历程， 1902 年， Emil Fischer 首先开始关注多肽合成，由于当时在多肽合成方面的知识太少，进展也相当缓慢当时合成采 用了苯甲酰，乙酰保护，脱去相当困难，而且容易导致肽链断裂。直到 1932 年， Max Bergmann等人开始使用苄氧羰基（ Z）来保护 α-氨基，该保护基可以在催化氢化或氢溴酸的条件下定量脱除，多肽合成才开始有了一定的发展。到 20 世纪 50 年代，随着越来越多的生物活性多肽的发现，大大推动了有机化学家们对多肽合成方法以及保护基的研究，因此这一阶段的研究成果也非常丰 富，人们合成了大量的生物活性多肽，包括催产素（ oxytocin），胰岛素等，同时在多肽合成方法以及氨基酸保护基上面也取得了不少成绩，这为后来的固相 合成方法的出现也提供了实验和理论基础。也就是这个阶段， Fred Sanger发明 了氨基酸序列测定方法，并为此获得了 1958 年的 Nobel 化学奖。还是他后来发明了 DNA 序列检测方法，并于 1980 年再次获得了 Nobel 化学奖，成为到目前为止唯一获得两次 Nobel 化学奖的科学家。 1963 年， Merrifield 提出了固相多肽合成方法（ SPPS），这个在多肽化学上具有里程碑意义的合成方法，一出来，就由于其合成方便，迅速，现在已经成为多肽合成的首选方法，随后的发展也证明了该方法不仅仅是一种合成方法，而且也带来了有机合成上的一次革命， 并成为了一支独立的学科，固相有机合成（ SPOS）。当然， Merrifield 也因此 荣获了 1984 年的 Nobel 化学奖。也正是 Merrifield ，他经过了反复的筛选，最 终屏弃了苄氧羰基（ Z）在固相上的使用，首先将叔丁氧羰基（ BOC）用于保 护 α-氨基并在固相多肽合成上使用，其可以在酸性条件下定量的脱除，反应也 非常迅速，在 30min 就可以反应完全。由于叔丁氧羰基（ BOC）方法中，氨基 酸侧链的保护基团大多基于苄基（ Bzl ），因此也称为 BOC-Bzl 策略。同时， Merrifield 在 20 世纪 60 年代末发明了第一台全自动多肽合成仪，并首次合成生 物蛋白酶，核糖核酸酶（ 124 个氨基酸）。随后的多肽化学研究主要集中在固 相合成树脂，多肽缩合试剂，氨基酸保护基的研究。 1972，Lou Carpino 首先将 9-芴甲氧羰基（ FMOC ）用于保护 α-氨基，其在碱性条件下可以迅速脱除， 10min 就可以反应完全，而且由于其反应条件温和，迅速得到广泛使用，到了 20 世纪 80 年代取代了叔丁氧羰基（ BOC），成为了固相多肽合成中的首选合 成方法。该方法中氨基酸的侧链大多基于叔丁基（ But），因此，也称为 仅供学习与交流，如有侵权请联系网站删除 谢谢 2 精品资料 FMOC-But 策略。同时，在多肽合成树脂，缩合试剂以及氨基酸保护，包括合 成环肽的氨基酸正交保护上也取得了丰硕的成果。 进入 21 世纪，随着蛋白质组学的研究深入，对于多肽化学的要求不仅仅是合成方法，而更多的集中在多肽标记与修饰方法，以及蛋白结构与功能模拟多肽的合成以及长肽或蛋白合成。 多肽化学合成的基本介绍 多肽化学合成方法，包括液相和固相两种方法。液相合成方法现在主要采用 BOC 和 Z 两种保护方法，现在主要应用在短肽合成，如阿斯巴甜，力肽，催产 素等，其相对与固相合成，具有保护基选择多，成本低廉，合成规模容易放大的许多优点。与固相合成比较，液相合成主要缺点是，合成范围小，一般都集中在 10 个氨基酸以内的多肽合成，还有合成中需要对中间体进行提纯，时间 长，工作量大。固相合成方法现在主要采用 FMOC 和 BOC 两种方法，它具有 合成方便，迅速，容易实现自动化，而且可以比较容易的合成到 30 个氨基酸左右多肽。 1.1．氨基酸保护基 20 种常见氨基酸，根据侧链可以分为几类：脂肪族氨基酸（ Ala ，Gly ，Val ， Leu， Ile，），芳香族氨基酸（ Phe，Tyr， Trp ，His），酰胺或羧基侧链氨基酸 Asp，Glu，Asn， Gln），碱性侧链氨基酸（ Lys，Arg ），含硫氨基酸 Cys，Met），含醇氨基酸（ Ser， Thr），亚氨型基酸（ Pro）。多肽化学合成 中氨基酸的保护非常关键，直接决定了合成能够成功的关键。因为常见的 20 中氨基酸中有很多都是带有活性侧链的，需要进行保护，一般要求，这些保护基 在合成过程中稳定，无副反应，合成结束后可以完全定量的脱除。合成中需要 进行保护的氨基酸包括： Cys，Asp，Glu， His ，Lys，Asn， Gln，Arg ，Ser， Thr，Trp， Ty