微柱凝胶抗人球蛋白法sop.docVIP

微柱凝胶抗人球蛋白法 1.?目的? 为规范微柱凝胶抗人球蛋白法在交叉配血试验中的应用，保证检测结果准确及临床输血安全有效，依据《输血实验室管理程序》的要求制定本规程。? 2.?适用范围? 适用于医疗机构输血科作交叉配血试验。? 3.?职责? 医疗机构输血科技术人员负责对交叉配血的试验。 ?4.?原理? 红细胞血型抗原与不完全抗体（IgG），在抗人球蛋白的桥梁作用下，经一定的离心力，产生特异性免疫凝集复合物或红细胞血型抗原与完全抗体（IgM）直接产生的特异性免疫凝集复合物，被排阻在具有三维空间网状结构的凝胶表层或凝胶颗粒间隙之中，判为阳性结果，表示待检血标本中含有相应红细胞血型抗原抗体；红细胞全部沉积于凝胶孔腔底部，即判断为阴性反应，表示待检血标本中无相应的红细胞血型抗原抗体。? 5.?所需设备和试剂?? 普通离心机、微注凝胶卡专用离心机、微柱凝胶卡专用孵育器、微量移液器、抗人球蛋白微柱凝胶卡?????? 6.?检测环境条件? 室湿应控制在18~27℃，湿度应保持30%~70%。? 7.?操作步骤? 7.1先将供（受）血标本制备0.5%红细胞低离子介质（LIM）悬液。? 7.2撕开卡的封膜，于反应胶中主（次）侧管加供（受）者?0.5%?红细胞LIM悬液100μl，加入受（供）血者血浆或血清25μl（或50μl）。? 7.3将检测卡37℃孵育15min取出，置离心机1800r/min离心1min或2500r/min离心1min。? 7.4取出，判定结果，结果判定标准按下：? 阳性? 4+?表示RBC绝大部份凝聚于凝胶表层? 3+?表示RBC多数凝聚于凝胶表层，少数RBC凝集颗粒悬浮于近胶表层? 2+?表示部份RBC沉积于胶底，部分RBC凝集颗粒悬浮于凝胶中? 1+?表示RBC多数沉积于胶底，可见少数RBC凝集颗粒悬浮于凝胶中? ±?表示RBC绝大多数沉积于胶底，极少数RCB凝集颗粒悬浮于近胶底? dcp?表示混合凝集外观，部份RBC凝集颗粒集结于凝胶表层，部分RBC沉于胶底?PH?表示部分溶血，凝胶管中液体呈清澈透明红色，凝胶中有残留RBC?H?表示完全溶血，凝胶管中液体呈清澈透明红色，凝胶中无RBC? 阴性 －?表示RBC全部沉积于胶底? 检验结果的解释： 阳性结果，表示受（供）血者血浆或血清中含供（受）血者红细胞血型抗原相应的抗体（不完全抗体IgG或完全抗体IgM），供受血者血液不相容。? 阴性结果，表示供受血者血液相容。?? 8.?质量控制? 8.1微柱凝胶试剂卡在有效期内使用，每批试剂卡在使用前用已知阴、阳性对照确认其有效性。? 8.2试剂质量控制方法? 8.2.1即作阴、阳性对照试验：撕开检测卡的封膜，于2个反应腔中分别加入已致敏IgG抗D的1%O型RhD(+)红细胞LIM悬液50μl、健康者1%O型RhD(+)红细胞LIM悬液50μl。? 8.2.2将检测卡于离心机1800r/min离心1min,2500r/min离心1min。? 8.2.3取出，结果判定同7.4? 9.注意事项? 9.1检测卡若在冰箱储存，使用前须放置实验室平衡至室温。? 9.2检测卡试验前，应3000r/min离心1min，正立放置待用。? 9.3如因运输过程产生的气泡，可将检测卡放置在漩涡震荡器上震荡，使气泡漂移至胶面为止，3000r/min离心2min。? 9.4细菌污染、纤维蛋白析出、抗凝不佳的血，可产生假阳性。? 9.5离心速度过快，时间过长，试剂失效等因素均可导致假阴性。?