葡聚糖凝胶柱层析.pptxVIP

实验1-1 核苷酸的醋酸纤维膜电泳分离鉴定一、原理：带电荷物质在电场中向相反电极移动的现象称为电泳。各种核苷酸在pH3.5的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液中电离差异，带有不同的净电荷，在电场中的迁移率不一样，从而达到分离的目的。二、仪器与试剂：1、水平电泳仪、水平电泳槽、紫外检测仪、电吹风、 醋酸纤维膜。2、0.02 mol/L 柠檬酸缓冲液(pH3.5)：取柠檬酸(C6H807.H20) 16.2g，柠檬酸三钠(Na3C6H507.2H20) 6.7g。用蒸溜水溶解，定容到2000ml。3、腺苷酸溶液： AMP、ADP、ATP，用水配成50mg/ml。三、实验步骤：1、准备好电泳槽，向二边槽内加入柠檬酸缓冲液(pH3. 5)，使两边等高。2、醋酸纤维素薄膜裁成2×8cm，先在蒸馏水润湿，然后凉干。在粗糙面距一端1.5cm画一条线，标出点样点。3、点样：用毛细管在点样点处点样2-3次， 注意斑点直径2～3mm。4、在电泳槽的阳极和阴极放入滤纸，使其下端浸入电泳缓冲液中。5、粗糙面朝上，将醋酸纤维膜平稳地放在电泳槽的滤纸架上，注意二点：点样点在负极。滤纸桥与醋酸纤维膜贴紧。6、盖上电泳槽的盖子，平衡10分钟.7、接上电极，点样端在负极，接通电源，调整电压在100V，室温通电40分钟。8、电泳完毕后，关闭电源，取出滤纸，电吹风吹干。9、在紫外灯下观察，可见核苷酸的深蓝色斑点。四、结果与讨论