生物制药工艺技术 染菌的检查、分析和防治、微生物代谢产物发酵制药 染菌的检查、分析和防治.pptVIP

无菌检查的流程： 噬菌斑（plaque）：由于噬菌体的作用而使布满细菌细胞的菌苔上，出现肉眼可见的一个个透亮的小圆斑。 项目7 发酵染菌的防治 6、发酵罐 5、旋塞 4、压力表 项目7 发酵染菌的防治 项目7 发酵染菌的防治 消灭死角 减少挡板和开孔 焊接光滑 法兰、阀门连接正好 减少残渣沉积 严格清洗和检查 项目7 发酵染菌的防治 项目7 发酵染菌的防治 4、设备渗漏引起的染菌及其防治 发酵设备、管道、阀门长期使用，由于腐蚀、摩擦和振动等原因，造成渗漏。 微小渗漏的检查：加入碱性水，用浸湿酚酞 指示剂的白布擦，有渗漏则白布显红色。 项目7 发酵染菌的防治 定期检修易坏部件 化学腐蚀 电化学腐蚀 磨蚀 设备加工不良 设备渗漏的防治 项目7 发酵染菌的防治 5、噬菌体污染及其防治措施 产生噬菌体的原因：自然界中的噬菌体在活菌体中大量生长。随着风沙尘土和空气流动传播，以及人们的走动、车辆的往来也携带着噬菌体到处传播，使噬菌体潜入生产各个环节，尤其是通过空气系统进入种子室、种子罐、发酵罐。 噬菌体的检测方法 双层琼脂法：在培养皿上倒入培养生产菌的培养基（加琼脂）作下层。同样的培养基中加入20％～30％培养好的种子液，再加入怀疑染噬菌体的发酵液，摇均匀后，铺上层。培养过夜观察培养皿上是否出现噬菌斑。 项目7 发酵染菌的防治 项目7 发酵染菌的防治 * 《生物制药工艺技术》 项目7 发酵染菌的防治 一、种子培养和发酵的异常现象 1、种子培养异常 （1）菌体生长缓慢 （2）菌丝结团 （3）代谢不正常 任务2 染菌的检查、分析和防治 项目7 发酵染菌的防治 2、发酵异常 （1）菌体生长差 （2）pH不正常 是所有代谢反应的综合反映。 （3）溶解氧异常 项目7 发酵染菌的防治 （4）泡沫过多 （5）菌体浓度过高或过低 项目7 发酵染菌的防治 二、染菌的检查与判断 1、染菌的检查 （1）显微镜检查法（最简单、最直接、最经常） （2）平板划线培养检查法 （3）肉汤培养检查法（酚红变色pH6.8-8.4） 项目7 发酵染菌的防治 取样 接入试管或斜面或平板 培养（细菌32~37℃，1~2天； 真菌25~28℃，1~3天） 肉眼检查 镜检 平板划线分离 项目7 发酵染菌的防治 项目7 发酵染菌的防治 项目7 发酵染菌的防治 2、以上3种检查法的比较 3种方法各有优缺点，显微镜检查方法简便、快速，能及时发现杂菌，但由于镜检取样少，视野的观察面也小，因此不易捡出早期杂菌。平板划线法的缺点是需经较长时间培养(一般要过夜)才能判断结果，且操作较繁琐，但它要比显微镜能检出更少的杂菌。 3、发酵过程的异常现象来判断染菌 （1）溶解氧水平异常显示染菌（谷氨酸） 项目7 发酵染菌的防治 发酵时间 溶氧浓度 正常发酵 污染噬菌体 发酵时间 溶氧浓度 正常发酵 污染好气性杂菌 污染非好气性杂菌 项目7 发酵染菌的防治 《发酵制药》 项目7 发酵染菌的防治 （2）排气中CO2异常显示染菌 工艺一定，尾气中CO2量变化有一定规律。 染菌引起糖的消耗变化，染好氧性杂菌，糖耗加快， CO2含量增加； 染噬菌体，糖耗减慢， CO2含量减少。 项目7 发酵染菌的防治 思 考 判断发酵是否染菌的根据？ 项目7 发酵染菌的防治 三、发酵染菌率和染菌原因分析 （一）发酵的染菌率 总染菌率 ＝ 发酵染菌批数 总投料批数 ×100％ 总染菌率指一年发酵染菌的批（次）数与总投料批（次）数之比的百分率。包括染菌后培养基经重新灭菌，又再次染菌的批次数在内。 项目7 发酵染菌的防治 （二）染菌原因分析 染菌原因分析就是总结染菌的教训，防范于未然。 （1）主要染菌原因 种子带菌，无菌空气带菌，设备渗漏，灭菌不彻底，操作管理不当。 项目7 发酵染菌的防治 日本抗生素发酵染菌原因分析 项目7 发酵染菌的防治 上海第三制药染菌原因分析 项目7 发酵染菌的防治 （2）染菌的杂菌种类分析 杂菌是耐热的芽孢杆菌： （灭菌、死角） 杂菌是不耐热菌： （种子带菌、空气带菌，设备渗漏，管理操作等） 杂菌是真菌： （灭菌不彻底或无菌操作不严格） 项目7 发酵染菌的防治 （3）染菌的时间分析 种子培养、发酵前期： 种子，培养基或设备灭菌 发酵中后期： 空气，补料，设备渗漏，操作不合理，一般不会种子问题 项目7 发酵染菌的防治 发酵染菌的主要原