检测生物组织中的糖类脂肪和蛋白质实践.pdfVIP

实验一 检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质 一．实验目的： 尝试用化学试剂检测生物组织中糖类、 脂肪和蛋白质， 阐明实验原理 —颜色 反应， 识记和区分用于可溶性还原糖、 脂肪、 蛋白质鉴定的试剂及产生的特定颜 色，初步掌握鉴定上述化合物的基本方法，学会描述实验现象，掌握 NaOH 溶 液和 CuSO4 溶液的使用方法。 二．实验原理： 某些化学试剂能使生物组织中的有关有机化合物，产生特定的颜色反应。 1．生物组织中普遍存在的可溶性糖类较多，有葡萄糖、果糖、麦芽糖和蔗糖。 前三种糖的分子内都含有游离的具还原性的半缩醛羟基，因此叫做 还原糖 ； 蔗糖分子内没有，为非还原糖。实验中所用的斐林试剂，只能鉴定生物组织 中可溶性还原糖，而不能鉴定可溶性非还原糖。 可溶性还原糖（如葡萄糖、果糖、麦芽糖）与斐林试剂发生作用，可生 成砖红色的 Cu 2O 沉淀。如： 2+ — O ↓（砖红色）+ H 葡萄糖 + 2Cu + 4OH 加热 葡萄糖酸 + Cu O 2 2 即 Cu 2+ 被还原成 Cu 2 O，葡萄糖被氧化成葡萄糖酸。 用斐林试剂鉴定还原糖时，溶液变化过程为： 浅蓝色 → 棕色 →砖红色沉淀 淀粉遇碘变 蓝色（直链） 或紫（红）色（支链） 。 2 ．脂肪和类脂（磷脂、糖脂、固醇脂等）统称为脂类。它是构成人体组织的正 常成分，不溶于水而易溶于酒精、乙醚、氯仿等脂溶剂中。在化学组成上， 脂类属于脂肪酸的酯或与这些酯有关的物质。脂类的主要功能是氧化供能。 脂肪主要存积于脂肪组织中，并以油滴状的微粒存在脂肪细胞浆内。 在病理检验中，脂类染色法最常用以证明脂肪变性，脂肪栓子以及肿瘤 的鉴别。脂类染色使用最广泛的染料是苏丹染料，最常用的有苏丹Ⅲ，苏丹 Ⅳ，苏丹黑及油红 O 等。脂肪被染色，实际上是苏丹染料被脂肪溶解吸附而 呈现染料的颜色。经研究认为组织中脂质在液态或半液态时，对苏丹染料着 色效果最好。 根据这一原理， 适当提高温度 （37 ℃-60 ℃）对组织切片染色效 果是有好处的。 脂类染色，用冰冻或石蜡切片，以水溶性封固剂封固，如甘油、明胶和 阿拉伯糖胶等。 脂肪可以被苏丹Ⅲ染液染成橘黄色或橙红色 （或被苏丹Ⅳ染液染成红色）， 胆脂素呈淡红色，脂肪酸不着色，细胞核呈蓝色。 苏丹Ⅲ染色液染色：脂肪呈橙红，胞核呈兰色 3 ．蛋白质与双缩脲试剂发生作用，产生紫色反应。（蛋白质分子中含有很多肽 2+ 键，在碱性 NaOH 溶液中能与双缩脲试剂中的 Cu 作用，产生紫色反应。） 三．实验材料 1．做可溶性还原性糖鉴定实验， 应选含糖高， 颜色为白色的植物组织， 如苹果、 梨。（因为组织的颜色较浅，易于观察。）经试验比较，颜色反应的明显程 度依次为苹果、梨、白色甘蓝叶、白萝卜。 2 ．做脂肪的鉴定实验。应选富含脂肪的种子，以花生种子为最好，实验前一般 要浸泡 3~4 小时（也可用蓖麻种子）。 3．做蛋白质的鉴定实验，可用富含蛋白质的黄豆或鸡蛋清。 4 ．淀粉的鉴定：马铃薯匀浆。 四、实验试剂 1．斐林试剂 （包括甲液：质量浓度为 0.1g/ mL NaOH 溶液和乙液：质量