二代测序之建库步骤.docxVIP

第一部分 DNA 酶处理：试剂为 PROMEGA( RQ1 RNase-Free DNase ) 目的：失活 DNase 酶 RNA （ TE 洗脱） 8 微升 RQ1 RNase-Free DNase 10X Reaction Buffer 1 微升 RQ1 RNase-Free DNase 1 微升 /微克 RNA 合计 10 微升 37℃ 30 分钟孵育 1 微升的 RQ1 DNase 终止液 65℃ 10 分钟使 DNase 酶失活 （PS:经验 这一步最好在核酸提取之前就处理好，具体步骤如下：取样本 反复冻融三次，然后一万转离心十分钟，取上清，用 0.22 微米的滤膜过滤，加 DNase，提核酸） 第二部分 RNA-seq system V2(cat.7102) 目的：生成并纯化 cDNA 一、第一链合成 融解第一链 cDNA 合成试剂（蓝色盖）和无核酸酶的水（绿色） 短时离心 A3ver1 放在冰上， votex A1Ver4 和 A2ver3，离心后放在冰上； 无核酸酶水放在室温； 在冰上，取 2ul A1 和 5ul total RNA （ 500pg 到 100ng）放在 0.2mlPCR 管里； 将 PCR 管放在 PCR 仪中运行程序 1： RNA 量≤ 1ng时， 65℃ 2min，4℃ 存放 RNA 量 1ng 时， 65℃ 5min，4℃ 存