CCK8操作说明和检测步骤.pdfVIP

WORD 完美格式编辑 DOJINDO 操作说明 细胞活性检测 1. 在 96 孔板中接种细胞悬液 (100 ml /孔 ) 。将培养板放在培养箱预培养 (在 37 ℃，5% CO2 的条件下 )。 2. 向每孔加入 10 ml 的 CCK- 8 溶液 (注意不要在孔中生成气泡，它们会影响 O.D 值 的读数) 。 3. 将培养板在培养箱内孵育 1-4 小时。 4. 用酶标仪测定在450 nm 处的吸光度。 5. 如果暂时不测定 O.D 值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入 10 ml 0.1 M HCl 溶 液或者 1% w/vSDS 溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在 24 小时内吸光度不会 发生变化。 细胞增殖 -毒性检测 1. 在 96 孔板中配制 100 ml 的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养 24 小时 ( 在 37℃， 5% CO2 的条件下 )。 2. 向培养板加入 10 ml 不同浓度的待测物质。 3. 将培养板在培养箱孵育一段适当的时间 (例如: 6,12, 24 或 48 小时 )。 4. 向每孔加入 10 ml CCK-8 溶液 (注意不要在孔中生成气泡，它们会影响 O.D 值的读 数) 。 5. 将培养板在培养箱内孵育 1-4 小时。 6. 用酶标仪测定在 450 nm 处的吸光度。 7. 如果暂时不测定 O.D 值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入 10 ml 0.1 M HCl 溶 液或者 1% w/vSDS 溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在 24 小时内吸光度不会 发生变化。 注意：如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加 CCK-8 之前更换新鲜培养基，去掉药 物的影响。当然药物影响比较小的情况可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的 空白吸收即可。 制作标准曲线 1. 先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞。 2. 按比例 ( 例如：1/2 比例 ) 依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要 做 3-5 个细胞浓度梯度，每组 3-6 个复孔。 3. 接种后培养 2-4 小时使细胞贴壁，然后加 CCK-8 试剂培养一定时间后测定 O.D 值， 制作出一条以细胞数量为横坐标 (X轴) ，O.D 值为纵坐标 (Y轴) 的标准曲线。根据 此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量 (使用此标准曲线的前提条件是实验的条件要 一致，便于确定细胞的接种数量以及加入 CCK-8 后的培养时间)。 专业资料整理 1 WORD 完美格式编辑 DOJINDO 检测步骤 CCK-8 检测步骤 1. 向各孔中加入 100 μl细胞悬液。a) 2. 在 37℃下预孵育培养板。b) 3. 向各孔中加入各浓度的待测溶液 c)10 μl。 4. 37℃下孵育。 5. 向各孔中加入 10 μl的 CCK-8 溶液 d)。 6. 37℃下孵育 1-4 小时。e) 7. 测定 450 nm 处的 OD 值。 a) 使用适当的培养基制备 50,000-100,000 个/ml 的细胞悬液。 b) 建议使用 CO2 培养箱过夜预培养。 c) 使用培养基或 PBS 来制备溶液。 d) 如果待测溶液有还原性，测定不含细胞，但含有 CCK-8 的待测溶液在450 nm 处的空白吸光度。如果该吸光度很小，则可以直接加入 CCK-8 ，如果吸光度相 对较大，则需要除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的 100 μl 培养基和 10 μl CCK-8 进行检测。 e) 白细胞可能需要培养较长时间。 活力计算 细胞活力* （％）=[A(加药)-A （空白）]/[A （