免疫学实验课件：实验三（1）间接凝集实验2.pptVIP

* * * 实验三 间接凝集实验(1) 一、目的要求 掌握间接凝集反应的原理、操作方法和基本用途 了解红细胞醛化和致敏的基本方法 掌握微量反应试验操作技术及凝集现象的判定 二、实验原理 将可溶性抗原（或抗体）先吸附于一种与免疫无关的、具有一定大小的不溶性颗粒（统称为载体颗粒）的表面，然后与相应抗体（或抗原）作用，在有电解质存在的适宜条件下，所出现的特异性凝集反应称为间接凝集反应，以此建立的检测方法称为间接凝集试验。 间接血凝试验:亦称为被动凝集试验，是将可溶性抗原致敏于红细胞表面，用以检测相应抗体，在与相应抗体反应时出现肉眼可见凝集,称为正向间接凝集试验。 如将抗体致敏于红细胞表面，用以检测样本中相应抗原，致敏红细胞在与相应抗原反应时发生凝集，称为反向间接凝集试验。 常用的载体有红细胞（O型人红细胞、绵羊红细胞），聚苯乙烯乳胶颗粒，其次为活性炭、白陶土、离子交换树脂、火棉胶等。间接凝集试验由于载体颗粒增大了可溶性抗原的反应面积，因此当颗粒上的抗原与微量抗体结合后，就足以出现肉眼可见的凝集反应。 将可溶性抗原或抗体吸附到载体表面的过程为致敏 间接凝集试验 间接血凝试验 碳素凝集试验 乳胶凝集试验 三、实验材料 1.96孔110°V型医用血凝板，与血凝板大小相同的玻板或塑料板。 2.微量移液器（50微升25微升）取液塑料咀。 3.微量振荡器。 4.口蹄疫血凝抗原。 5.口蹄疫阴性对照血清。 6.口蹄疫阳性对照血清。 7.稀释液。 8.待检血清。 四、操作方法 1.醛化SRBC的制备 无菌采集绵羊血，玻璃珠脱纤维抗凝，沉集绵羊红细胞用10~20倍体积的0.11mol/L pH7.2 PBS洗涤4~6次，最终配成10%细胞悬液，预冷到4℃后放于冰箱，缓慢加入等量的1%戊二醛（0.11mol/L pH7.2 PBS配制）并继续摇动30~60min，然后用PBS洗5次，最后用PBS配成10%的悬液，加入0.01%NaN3 防腐，4℃冰箱保存备用。 2.醛化SRBC的致敏 2.2 以0.2% pH5.2醋酸缓冲液稀释抗原（最适浓度经预实验确定），置于37℃水浴中预热。 2.3 在5%红细胞悬液中加入等体积的抗原溶液混匀，置于37℃水浴中作用30min,每隔5min振荡混匀一次。 2.1 用0.11mol/L pH7.2 PBS将10%的醛化细胞洗涤2次，每次以3000r/min 离心10min,最后用0.2% pH5.2醋酸缓冲液配制成5%的悬液，置于37℃水浴中预热。 2.4 以3000r/min 离心10min，用稀释液将致敏红细胞洗涤3次，最后配成1%致敏红细胞悬液备用。 间接血凝试验（微量法）的具体操作步骤 * *