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实验三、细菌分离培养及移植 1.细菌分离培养及移植 [目的要求] 1.掌握细菌分离培养的基本要领和方法 2. 掌握细菌移植的方法及注意事项 [实验材料] 菌种：大肠杆菌 培养基：普通肉汤、普通琼脂斜面、 普通平板 器械：酒精灯、接种环、打火机、 记号笔等 [实验内容] 平板划线分离培养法 斜面培养基接种法 液体培养基接种法 细菌的分离方法 细菌分离就是把病料中的病原菌或把目的菌从微生物的混合材料中分离培养出来，并获得目的菌的单一生长材料，从而进行诊断及有关研究工作。 分离培养的目的 就是要获得纯培养。细菌的纯培养就是只含一种细菌的培养物，最理想的纯培养是一个细菌的后代。 细菌的移植接种 就是把某种细菌材料移种到一个新的培养基上，使它在其上生长。 细菌分离培养及移植注意事项 无菌操作 无菌操作是指在微生物研究过程中，既要避免各种外界的微生物进入操作对象又要杜绝操作对象污染周围环境的操作技术 1. 实验结果 将接好细菌的斜面、肉汤培养基及琼脂培养皿（倒置放）置37℃培养箱培养 经18—24h培养观察细菌生长情况。然后做好记录 2.自然界中微生物分布 一、目的要求 1、了解自然界中微生物的分布及主要意义 2、掌握空气、水、土壤中微生物的检查方法 二、实验材料 1、已高压灭菌材料：500mL水瓶、刻度吸管、空平皿、空试管、棉签、生理盐水、营养琼脂（预热溶解）、营养琼脂平板 2、其他：泥土、天平、称量纸、洗耳球等 三、实验内容 1、空气中的微生物学检查（沉降法）（每组1个） 将平板打开暴露于空气10min，然后盖上平皿盖（倒置）置于37℃恒温培养18～24h。 2、水中细菌总数的测定（倾注法）（每组共做2个） 用灭菌吸管取 1mL自来水到灭菌的空平皿内然后倒入约8-10mL左右溶化后冷至45℃的营养琼脂混合均匀（在桌面上轻轻旋转平皿，使水样与培养基充分混匀）后静置凝固后将平皿倒置置于37℃恒温培养18～24h。 倾注培养法 3、土壤中的微生物（倾注法） （每组共做2个） 取表土下层10cm处泥土1g，放入灭菌空试内，然后加入己灭菌10mL生理盐水混合均匀，做成1：10的泥土悬液（静置让泥土下沉，取上清液作稀释） 按10倍稀释法作1：100、1：1000的稀释。 从1：1000的稀释液中取1mL至无菌空平皿（2个）中，然后倒入融化后冷却至45℃的营养琼10mL左右（在桌面上轻轻旋转平皿，使泥土样的稀释液与培养基充分混匀）凝固后，倒置放37℃恒温培养18～24h. 4、人体与物体中的微生物 接取人体及物体各部位组分（包括头发、口腔、牙垢、手、衣服、钱等）放于营养琼脂表面或与营养琼脂表面接触，用于微生物的检查，营养琼脂平皿倒置37℃恒温培养18～24 h。 实验结果 经18—24h培养观察细菌生长情况，并计算菌落总数，然后做好记录。 * * 自然界微生物分布 *
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