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大肠杆菌电转化感受态细胞制备及转化方法 (Jin Quan-Wen Lab at XMU) 一、大肠杆菌电转化感受态细胞制备： 第一天： 用枪头或接种环挑取单克隆菌落， 接种入盛有 5ml LB 液体培养基的培养管中，可以准备两管。 37 C，220rpm，培养过夜（ 14-16 个小时）。 高温灭菌大的离心瓶（ 250-500ml）和几个 50ml 离心管，以备第二天离心收集细菌用。 准备几瓶灭菌水 （总量约 1.5 升），保存于冷冻室中以备第二天重悬浮细菌细胞用。 第二天： 1．取 2-5ml 过夜培养液，接入 500ml LB ( 或 2XTY) 液体培养基中 , 控制起始 OD600 = 0,03-0,05。 37 C，220rpm，振摇 2-4 小时，每半小时测一次 OD，当 OD 值达到 0.4 时，停止培养。 2．将菌液在冰上预冷 30 分钟。同时，开启离心机，预冷至 4 C。 3．随后将菌液分装到 250ml 或 500ml 预冷的离心瓶中， 4 C，4000rpm 离心 分钟。  15 4．弃上清液，先用少量（如 20-50ml）灭菌的冰水重悬沉淀的细胞团，然后加 水稀释至离心瓶的 2/3 体积，充分悬起细胞（可以用手握住瓶体上部震荡！ ）。 4 C， 4000rpm 离心 15 分钟。 5．弃上清液，加少量灭菌水，重悬菌体，再加水至所有细胞悬浮约 500ml