演示版DNA的粗提取与鉴定(优秀课件).ppt

最新. * 答：因为DNA不溶于冷酒精，而其他物质可以溶解在酒精中，使含杂质较少的DNA丝状物可以析出,悬浮于溶液中 讨论： （2）观察丝状物呈什么颜色？ 答：白色 （1）为什么要加50mL的冷酒精？ 最新. * 取两支20 mL的试管，各加入氯化钠的物质的量浓度为0．015 mol／L的溶液5 mL，将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解。然后，向两支试管中各加入4mlL的二苯胺试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热 5 min，待试管冷却后，观察并且比较两支试管中溶液颜色的变化 ⑧ DNA的鉴定 最新. * DNA的粗提取与鉴定 最新. * DNA的提取和鉴定 DNA从哪 儿提取？ 怎样将DNA与 细胞中的其他 物质分离？ 怎样鉴定 我们提取 的DNA？ 最新. * 内容解析 基础知识 DNA的物理化学性质 化学性质 在沸水浴条件下，DNA与二苯胺反应呈蓝色 最新. * 物理性质 溶解性： 在0.14mol/L NaCl溶液中溶解度最小 不溶于酒精 耐受性： 80℃以上高温变性 被DNA酶分解，而不被蛋白酶分解 洗涤剂可以溶解细胞的细胞膜，去除脂质和蛋白质,但对DNA没有影响 最新. * 如何利用DNA的物理化学性质提取和鉴定DNA？ 思考： 1.洗涤剂能溶解细胞膜，但不会破坏DNA 将DNA从细胞中提取出来 2、当氯化钠的物质的量浓度为 2 mol／L时，DNA的溶解度最大，浓度为 0．14 mol／L时，DNA的溶解度最低。 可以使DNA在盐溶液中溶解或析出 最新. * 3、DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精。 可以将DNA与蛋白质进一步分离 4、DNA与二苯胺在沸水浴条件下呈蓝色 鉴定DNA 最新. * 提取DNA的实验步骤 破碎细胞，获取含DNA的滤液 选取实验材料 去除滤液中的杂质 析出DNA 鉴定DNA 最新. * 二、DNA的粗提取与鉴定的实验设计 （一）实验材料的选取 材料：鱼卵、猪肝、菜花、香蕉、鸡血、哺乳动物的红细胞、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、在液体培养基中培养的大肠杆菌。（从中选取2～3种实验材料） 原则：凡是含有DNA的生物材料都可以考虑，但选用DNA含量相对较高的生物组织，成功的可能性更大 最新. * 无细胞壁，将其加入蒸馏水中 ，使其破裂释放DNA 有细胞壁，需要先用一定的洗涤剂和食盐溶解细胞膜，进行充分的搅拌和研磨，才能使其破裂释放DNA （二）破碎细胞，获取含DNA的滤液 动物细胞： 植物细胞： 最新. * 讨论：加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？ 答：洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，有利于DNA的释放；食盐的主要成分是NaCl，有利于DNA的溶解 ②实例：提取洋葱DNA时，在切碎的洋葱中加入一定的洗涤剂和食盐，进行充分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液 最新. * 答：研磨不充分会使细胞核内的DNA释放不完全，提取的DNA量变少，影响实验结果，导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等 讨论：如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响？ （三）去除滤液中的杂质 为了纯化提取的DNA需要将滤液作进一步处理 讨论：此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞成分？ 答：可能含有核蛋白、多糖和RNA等杂质 最新. * 讨论：为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质 答：用高盐浓度的溶液溶解DNA，能除去在高盐中不能溶解的杂质；用低盐浓度使DNA析出，能除去溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通过反复溶解与析出DNA，就能够除去与DNA溶解度不同的多种杂质 最新. * 讨论：方案二与方案三的原理有什么不同？ 答：方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白，从而使提取的DNA与蛋白质分开；方案三利用的是DNA和蛋白质对高温耐受性的不同，从而使蛋白质变性，与DNA分离。 最新. * 最新. * （四） DNA的析出与鉴定 DNA的析出用的是与滤液体积相等的冷却的酒精溶液（体积分数为95 ％） ，静置2－3min，溶液中会出现白色丝状物，这就是粗提取DNA。用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸取上面的水 1、DNA的析出 最新. * 最新. * 2、 DNA的鉴定 鉴定DNA时在试管中先加入物质的量的浓度为2mol/L 的NaCl溶液5ml于两只试管中，其中一只加入DNA丝状物，各加入二苯胺4ml 试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min,待试管冷却后，比较两只试管中溶液颜色的变化，看看溶解有DNA的溶液是否有蓝色 最新. * （一）案例一：以鸡血为实验材料进行DNA的粗提取 三、实验案例 ②鸡血细胞极易吸水胀破，而用动物肝脏细胞作实验材料常常需要匀