【CN110760614A】一种登革热病毒核酸快速检测分型以及溯源区分的方法【专利】[学习].pdfVIP

(19) 中华人民共和国国家知识产权局 (12) 发明专利申请 (10) 申请公布号 CN 110760614 A (43) 申请公布日 2020.02.07 (21) 申请号 201910356801. 4 (22) 申请日 2019. 04. 29 (71) 申请人 杭州市上城区疾病预防控制中心 地址 310009 浙江省杭州市上城区华藏寺 巷8幢 (72) 发明人 田瑞 　 郁旷明 　 吴爱萍 　 李林 　 王晓燕 　 郑丽芳 　 李娜 　 胡锦锋 　 (74) 专利代理机构 中山市华朋弘远知识产权代 理事务所 ( 普通合伙 ) 44531 代理人 汤畅阳 (51)Int. Cl. C12Q 1/70(2006. 01) C12Q 1/686(2018. 01) C12N 15/11(2006. 01) 权利要求书 1页 说明书 4页 附图5页 (54) 发明名称 一种登革热病毒核酸快速检测、 分型以及溯 源区分的方法 (57) 摘要 本发明公开了一种登革热病毒核酸快速检 测、分型以及溯源的方法， 其特征在于， 根据登革 热病毒核酸序列设计一对特异性引物， 使用 RT- PCR检测方法对登革热病毒检测并分型， 通过高 分辨率熔解曲线区分登革热病毒来源。 本发明提 供一种登革热病毒快速检测、 分型以及来源区分 的方法，试剂成本低， 方法简单， 同时减少操作流 程和步骤，减少实验错误和误差， 此外通过 HRM分 析，对登革热病毒来源进行预判定， 对登革热疫 情起到即时预警作用。 A 4 1 6 0 6 7 0 1 1 N C 1 / 11 CN 110760614 A 权　利　要　求　书 1/1 页 1. 一种登革热病毒核酸快速检测、 分型以及溯源区分的方法， 其特征在于，根据登革热 病毒核酸序列设计一对特异性引物， 使用RT- PCR检测方法对登革热病毒检测并分型， 通过 高分辨率熔解曲线区分登革热病毒来源。 2. 根据权利要求 1所述的一种登革热病毒核酸快速检测、 分型以及溯源区分的方法， 其 特征在于，所述的一对特异性引物是根据 4种不同血清型登革热病毒核酸 E蛋白核酸序列设 计的，正向引物为：GACTTYGTGGAAGGDSTBTCAGG； 反向引物为：GTCAGGTTBSCYTCWATGCA。 3. 根据权利要求 1所述的一种登革热病毒核酸快速检测、 分型以及溯源区分的方法， 其 特征在于，使用RT- PCR检测方法对登革热病毒检测并分型， 其所述方法如下： (1)RT - PCR反应体系为2 ×SYBR Green Buffer 10uL，反转录酶0.4uL， DNA聚合酶 1.2uL，10umol/L正反向引物各0.8uL， 病毒核酸模板2uL，DEPC水补齐至20uL； (2)RT- PCR扩增条件：42℃逆转录反应5min， 95℃预变性10s；95℃变性5s，50- 54℃退火 10- 30s，72℃延伸10 - 30s，45个循环；HRM分析扫描条件95℃5s， 65℃1mi