7.10 菌种保藏微生物学.pdf

第五节 菌种的衰退、复壮和保藏 二、菌种的保藏 菌种 （culture，stock culture ） 是一种极其重要和珍贵的生物资源 ！ 菌种保藏 （preservation，conservation， maintenance ）是一项十分重要的基础性工作。 国家设立专门的菌种保藏机构 任务：收集菌种， 并将它们妥善保藏，使之 不死、不衰、不乱，便于 研究、交换和使用。 1. 菌种保藏的原理 （1）挑选典型的优 良的纯种， 最好用芽孢或分生孢子等休眠体； （2）创造一个利于长期休眠的环境条件， 干燥、低温、缺氧、避光、缺乏营养等 （3）添加保护剂 避免保藏过程中细胞受伤 干燥和低温是菌种保藏中的最重要因素 较低的温度更有利于保藏 液氮 （-195℃）＞ 低温冰箱 （-70℃）＞ 普通冰箱冷冻 （-20℃）＞ 普通冰箱冷藏 （4℃） 水分在低温下形成冰晶，破坏细胞结构 加保护剂：0.5 mol ／L 的甘油、海藻 糖、脱脂牛奶、血清白蛋白、糊精等 。 2. 菌种保藏的方法 一种 良好的菌种保藏方法 菌种稳定性高 方法的通用性 操作的简便性 设备的普及性 p234 常见的菌种保藏方法 （1）定期移植保藏法 （2 ）冷冻干燥保藏法 （3 ）液氮保藏法 （4 ）基因工程菌保藏 （1）定期移植保藏法 操作方法： ① 菌种接种在液体、斜面或穿刺在半固体培 养基上； ② 生长完全 ③放置密封盒中，普通冰箱4℃保藏， 相对湿度50 ％～70 ％以下； 或培养物用保护剂制成菌悬液， 加入菌种瓶中，-80℃、 -20℃冰箱保藏。 例：将菌液与50%浓度甘油1:1等体积混 合于离心管中，低温冰箱保存 保种机制： （1）低温可减缓生长速度， （2 ）通气不良， （3 ）有限的营养。 保藏时间：一般半年～几年传代1次 保藏种类：各大类微生物 定期移植保藏法 优点： 操作简便，不受条件限制，各类微生物均可。 缺点： 时间短，传代多，易退化。有缘学习更多+谓 ygd3076或关注桃报：奉献教育（店铺） （2 ）冷冻干燥保藏法 将含保护剂的菌悬液在冻结状态下 升华其中水分，最后达到干燥。 培养物用无菌脱脂牛奶作保护剂 制成菌悬液，加入安瓶中，冷冻、抽真 空、封口。 冷冻干燥保藏法优点： 低温、干燥、无氧、有保护剂，可保藏各 大类微生物，保藏时间可达几十年，是目 前使用最广、最有效的保藏方法。一般专 业机构大都使用此法保藏。 缺点：不能保藏真菌菌丝。 （3 ）液氮保藏法 操作方法： 液氮温度可达－196℃。把菌悬液 放入耐低温的安瓿中，置液氮罐 提桶内，预冷、保藏。 液氮保藏法 优点：保藏效果好。 缺点：价格昂贵。 （4）基因工程菌保藏 携带外源基因的重组质粒通常是 不稳定的，容易丢失。一般情况，细 胞丢失了质粒，生长会加快。 有抗性标记的工程菌保藏是利用在 抗性培养基中只有含重组质粒的细胞 才能生长。 注意： 1.不同的菌种需要用不同的保藏方法。 2.没有1种保藏方法适宜所有的微生物。 3.选择保藏方法一定要进行综合考虑。 4.重要的菌株，采用多种方法保藏。 7种不同的保藏方法比较 方法名称 主要措施 适宜菌种 保藏期 评