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土壤中产淀粉酶芽孢杆菌的筛选及其淀粉 酶活力的测定 姓名：李青嵘 班级：生工 102 学号： 1014200044 同组组员：黄得凤 同组组员：张旭霞 摘要 本实验通过 90℃水浴 20min 预处理，杀死无芽孢菌体，再以弱选择性淀粉 培养基和稀释涂布平板法对土壤中产淀粉酶芽孢杆菌进行初步筛选，又通过分 区划线法对初筛菌株进一步分离纯化，得到两株纯培养的芽孢杆菌。并通过耐 盐试验、明胶试验、糖发酵试验、 VP 试验、吲哚试验，等多项生理生化实验对 筛选出来的菌种进行鉴定，鉴定结果均为蜂房芽孢杆菌。进一步通过 3，5-二硝 基水杨酸显色法对菌种的淀粉酶活力进行鉴定，测定结果分别为 10.68MMU ，12.64MMU 。 关键词： 淀粉酶，芽孢杆菌，酶活测定 1. 前言 淀粉酶是催化淀粉水解的一类酶的总称，广泛存在于动物、植物和微生物 中。目前淀粉酶广泛应用多种领域，在发酵工业中淀粉酶可用于淀粉原料的液 化及糖化工艺；在食品工业中淀粉酶可用于面包焙烤，使其体积更大，颜色更 好，颗粒更柔软；在农业中淀粉酶可作为饲料添加剂，降解饲料中淀粉营养成 分以利于动物吸收利用；此外，淀粉酶在医疗卫生、废料处理、纺织印染等领 域都有广泛应用。 目前生产应用的淀粉酶主要来源于微生物，并集中在几种细菌和真菌中， 尤其以芽孢杆菌所产的淀粉酶较多。其原因首先芽孢杆菌属 (Bacillus) 中能产生 淀粉酶的菌种较多；其次，芽孢杆菌属产的淀粉酶有较好的应用价值，如凝结 芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、嗜热芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌产的淀粉酶具有耐热 性；再次，芽孢杆菌应用历史悠久，广泛用于饲料添加剂，其安全性有保证。 本文主要从土壤中筛选产淀粉酶的芽孢杆菌，分离纯化，并进行酶活测定，从 而获得有经济价值比较高的菌株。 2. 材料与方法 2.1. 实验材料 2.1.1. 土样的采集 从广州大学 B-8门前采集土样？ g，每天加入 2 g淀粉和 10 ml水进行培养 5天。 2.1.2. 培养基 2.1.2.1. 筛选及活化培养基 [1] 淀粉 20 g，蛋白胨 10 g，NaCl 2.5 g，琼脂 10 g，自来水 1000 ml, pH 自然。 2.1.2.2. 斜面种子培养基 [2] 牛肉膏 3 g，蛋白胨 10 g，NaCl 5 g，琼脂 15～20 g，自来水 1000 ml ，pH 7.2～7.4； 2.1.2.3. 摇瓶发酵培养基 [3] 称取可溶性淀粉 2 g ，蛋白胨 1 g ，牛肉膏 0．3 g ，氯化钠 0．5 g 溶于 100 mL 蒸馏水中。 pH自然； 2.1.2.4. 蛋白胨液体培养基（作吲哚实验用） [2] 蛋白胨 10 g，NaCl 5 g，自来水 1000 ml，pH 7.2～7.4，121℃ 灭菌20 min ； 2.1.2.5. 葡萄糖蛋白胨培养基（ VP 和 MR 试验用） [2] 蛋白胨 5 g，葡萄糖 5 g，NaCl 5 g ，自来水 1000 ml，pH 7.2～7.4，121℃ 灭 菌20 min； 2.1.2.6. 糖发酵培养基（作细菌糖发酵试验用） [2] 蛋白胨 2 g，NaCl 5 g，K2HPO4 0.2 g，1%溴麝香草酚蓝水溶液 3 ml ，待试 糖 10 g(一