现代分子生物学第三 染色体与dna.pptxVIP

第二章 染色体与DNA;主要内容：;回顾知识点;;DNA的二级结构;DNA的高级结构;双螺旋DNA拧紧则导致正超螺旋， 而双螺旋DNA的松开导致负超螺旋。 超螺旋DNA分子比松散分子能量高。对于负超螺旋，这一能量会使DNA螺旋易于局部解旋，负超螺旋有利于需要解旋过程的进行，如转录起始和复制起始。 ;三、DNA的复制;;1、定义：由亲代DNA生成子代DNA时，每个新形成的子代DNA中，一条链来自亲代DNA，而另一条链则是新合成的，这种复制方式称半保留复制。;2、实验证据（1958 Meselson 和Stahl ）：;“Heavy” DNA;3、DNA半保留复制的???物学意义：;（二）与DNA复制有关的物质; 5、 DNA聚合酶:以DNA为模板的DNA合成酶 (1)都以dNTP为底物。 (2)都需要Mg2+激活。 (3)聚合时必须有模板链和具有3’-OH末端的引物链。 (4)链的延伸都方向为5→3。;大肠杆菌DNA聚合酶 ;; 6、DNA连接酶（1967年发现）：若双链DNA中一条链有切口，一端是3’-OH，另一端是5‘-磷酸基，连接酶可催化这两端形成磷酸二酯键，而使切口连接。 但是它不能将两条游离的DNA单链连接起来 DNA连接酶在DNA复制、损伤修复、重组等过程中起重要作用 ;7、DNA 拓扑异构酶(DNA Topisomerase)： 主要功能是消除DNA解链过程中所 产生的扭曲力。 ;拓扑异构酶?：使DNA一条链发生断裂和再连接，作用是松解负超螺旋。主要集中在活性转录区，同转录有关。例：大肠杆菌中的ε蛋白 拓扑异构酶Π：该酶能暂时性地切断和重新连接双链DNA，作用是将负超螺旋引入DNA分子。同复制有关。 例：大肠杆菌中的DNA旋转酶 ;8、DNA 解链酶（DNA helicase) 通过水解ATP获得能量来解开双链DNA。 E.coli中的rep蛋白就是解链酶，还有解链酶I、II、III。;;;（三）DNA的复制过程（大肠杆菌为例）;;1、双链的解开; 从复制原点到终点，组成一个复制单位，叫复制子;复制起点固定;;双链解开、复制起始;2、RNA引物的合成;DNA的半不连续复制（semi-discontinuous replication);;4、切除RNA引物，填补缺口，连接相邻的DNA片段 （复制终止）;;;大肠杆菌;双链环状、θ型复制、双向等速 ;(四).复制的几种主要方式;③多个起始点的双向复制（如真核生物）;2 环状DNA双链的复制;滚环型： 单向复制的特殊方式 如：ΦΧ174的双链环状DNA复制型（RF）;;D环复制;（五）真核生物中DNA的复制特点;;;1.新链同时合成方向5’? 3’ 2. 前导链, 滞后链{冈崎片段 1000bp~2000bp (大 肠杆菌), 100~200bp (真核生物)} 3. RNA引物 的合成; DNA链的延伸; 引物的切除, 缺口补平, 连接.;四、DNA的修复;1、错配修复; 根据母链甲基化原则找出错配碱基的示意图; 甲基化指导的错配修复示意图;2、碱基切除修复;胞嘧啶去氨基生成尿嘧啶;如果复制发生就会产生一个突变;.糖甘水解酶识别改变了的碱基，把碱基从N-β-糖苷键处切下来，在DNA链上形成去嘌呤或去嘧啶位点，统称为AP位点。;由AP磷酸内切酶将受损核甘酸的糖甘-磷酸键切开;。 DNA连接酶连接;3、核苷酸切除修复;识别损伤部位;4 、DNA的直接修复;五、 DNA的转座;1983. Barbara McClintock ;;1983年，McClintock由于在50年代提出并发现了可移动遗传因子（jumping gene或称mobile element）而获得Nobel奖。;（二）转座子的类型和结构特征;IS特点;复合型转座子;TnA家族;转座作用的遗传学效应;;1、插入序列(IS);; 复合转座子是一类带有某些抗药性基因（或其他宿主基因）的转座子，其两翼往往是两个相同或高度同源的IS序列 ;;(三）转座作用的机制;复制性转座子;非复制性转座子;反转录病毒整合入宿主DNA中的分子机制，其本质是转座;;