酶制剂生产技术 pH﹑温度与通气等因素的调控 2.4.2pH﹑温度与通气等因素的调控.ppt

酶制剂生产技术模块二 酶的发酵生产 生物化工学院 兰欣 引 入 同学们, 上节课我们学习了发酵工艺流程中最为基本的消毒灭菌与无菌操作（回顾）。接下来介绍发酵过程中的调控。 学习情境七 发酵过程的调控 工作任务 （一）酶的发酵动力学 工作任务 （二）pH﹑温度与通气等因素的调控 * 工作任务 （二）pH﹑温度与通气等因素的调控  培养基的pH必须控制在一定的范围内，以满足不同类型微生物的生长繁殖或产生代谢产物。为了维持培养基pH的相对恒定，通常在培养基中加入pH缓冲剂，或在进行工业发酵时补加酸、碱。 通常培养条件： 细菌与放线菌：pH7~7.5 酵母菌和霉菌：pH4.5~6范围内生长 1.pH值的控制 细胞发酵产酶的最适pH值与生长最适pH值往往有所不同。细胞生产某种酶的最适pH值通常接近于该酶催化反应的最适pH值。 有些细胞可以同时产生若干种酶，在生产过程中，通过控制培养基的pH值，往往可以改变各种酶之间的产量比例。 * 通常在生物学范围内每升高10℃，生长速度就加快一倍， 2.温度的控制 有些细胞发酵产酶的最适温度与细胞生长最适温度有所不同，而且往往低于生长最适温度。这是由于在较低的温度条件下，可以提高酶所对应的mRNA的稳定性，增加酶生物合成的延续时间，从而提高酶的产量。 枯草杆菌的最适生长温度为34～37℃ 黑曲霉的最适生长温度为28～32 ℃ * 3.溶解氧的控制 在酶的发酵生产过程中， 处于不同生长阶段的细胞，其细胞浓度和细胞呼吸强度各不相同，致使耗氧速率有很大的差别。因此必须根据耗氧量的不同，不断供给适量的溶解氧。 一般说来，通气量越大、氧气分压越高、气液接触时间越长、气液接触面积越大，则溶氧速率越大。培养液的性质，主要是黏度、气泡、以及温度等对于溶氧速率有明显影响。 调节通气量 调节氧的分压 调节气液接触时间 调节气液接触面积 改变培养液的性质 控制溶解氧方法 大型发酵罐搅拌装置 通气搅拌解决了 液体深层培养时 的供氧问题。 * 4、提高酶产量的措施 A 添加诱导物 对于诱导酶的发酵生产，在发酵过程中的某个适宜的时机，添加适宜的诱导物，可以显著提高酶的产量。例如，乳糖诱导β-半乳糖苷酶，纤维二糖诱导纤维素酶，蔗糖甘油单棕榈酸诱导蔗糖酶的生物合成等。 诱导物一般可以分为3类 酶的作用底物 酶的催化反应产物 作用底物的类似物 1)通过条件控制提高酶产量 B控制阻遏物的浓度 阻遏作用根据机理不同，可分为：产物阻遏和分解代谢物阻遏两种。 1.产物阻遏作用是由酶催化作用的产物或者代谢途径的末端产物引起的阻遏作用。 2.分解代谢物阻遏作用是由分解代谢物（葡萄糖等和其它容易利用的碳源等物质经过分解代谢而产生的物质）引起的阻遏作用。 控制阻遏物的浓度是解除阻遏、提高酶产量的有效措施。 为了减少或者解除分解代谢物阻遏作用，应当控制培养基中葡萄糖等容易利用的碳源的浓度。 * 采用其他较难利用的碳源，如淀粉等 采用补料、分次流加碳源 添加一定量的环腺苷酸（cAMP） 对于受代谢途径末端产物阻遏的酶，可以通过控制末端产物的浓度的方法使阻遏解除。 * C添加表面活性剂 表面活性剂可以与细胞膜相互作用，增加细胞的透过性，有利于胞外酶的分泌，从而提高酶的产量。 将适量的非离子型表面活性剂，如吐温（Tween）、聚乙二醇辛基苯基醚 (Triton)等添加到培养基中，可以加速胞外酶的分泌，而使酶的产量增加。 由于离子型表面活性剂对细胞有毒害作用，尤其是季胺型表面活性剂是消毒剂，对细胞的毒性较大，不能在酶的发酵生产中添加到培养基中。 * D 添加产酶促进剂 产酶促进剂是指可以促进产酶、但是作用机理未阐明清楚的物质。例如，添加一定量的植酸钙镁，可使霉菌蛋白酶或者桔青霉磷酸二酯酶的产量提高1～20倍；添加聚乙烯醇（Polyvinyl alcohol）可以提高糖化酶的产量。 产酶促进剂对不同细胞、不同酶的作用效果各不相同，现在还没有规律可循，要通过试验确定所添加的产酶促进剂的种类和浓度。 在用葡萄糖和乳糖作碳源的培养基上培养大肠杆菌，开始时，大肠杆菌只能利用葡萄糖而不能利用乳糖，只有当葡萄糖被消耗完毕以后，大肠杆菌才开始利用乳糖。 分解葡萄糖的酶是大肠杆菌细胞内一直存在的酶——组成酶 思考：这样有什么意义？ 分解乳糖的酶是在乳糖诱导下合成的酶——诱导酶 实例１ 抑制 葡萄糖 中间产物 α-酮戊二酸 谷氨酸 实例2：　谷氨酸棒状杆菌合成谷氨酸的途径 谷氨酸脱氢酶 NH4+ 分析： １、两实例的共同点是： ２、由两实例区别得出： 微生物代谢调控主要是通过酶的调节来实现的 实例１，通过调节酶的合成，控制代谢过程 实例２