《实验三__显微镜油镜的使用及细菌形态观察》.pptVIP

二、芽胞染色的原理 细菌的芽胞具有厚而致密的壁，透性低，不易着色，若用一般染色法只能使菌体着色而芽胞不着色(芽胞呈无色透明状)。芽胞染色法就是根据芽胞既难以染色而一旦染上色后又难以脱色这一特点而设计的。所有的芽胞染色法都基于同一个原则：除了用着色力强的染料外，还需要加热，以促进芽胞着色。当染芽胞时，菌体也会着色，然后水洗，芽胞染上的颜色难以渗出，而菌体会脱色。然后用对比度强的染料对菌体复染，使菌体和芽胞呈现出不同的颜色，因而能更明显地衬托出芽胞，便于观察。 三、芽孢染色法步骤 (1)取37℃培养24h ～36h的枯草芽孢杆菌作涂片，并干燥，固定。 (2)于载片上滴入3～5滴5％孔雀绿水溶液。 (3)用试管夹夹住载玻片在火焰上用微火加热，自载玻片上出现蒸汽时，开始计算时间约4～5min。加热过程中切勿使染料蒸干，必要时可添加少许染料。 (4)倾去染液，待玻片冷却后，用自来水冲洗至孔雀绿不再褪色为止。 (5)用0.5％沙黄水溶液(或0.05％碱性复红)复染1min，水洗。 (6)制片干燥后用油镜观察。芽孢呈绿色，菌体红色。 供芽孢染色用的菌种应控制菌龄，使大部分芽孢仍保留在菌体上为宜 实验三__显微镜油镜的使用及细菌形态观察 一、实验目的 学习并掌握普通光学显微镜的构造和油镜的使用技术及维护的基本知识 （一）显微镜油镜的使用 二、显微镜及油镜使用原理 显微镜的构造 1.光学部分目镜 、 物镜 、 照明装置(聚光镜、 虹彩光圈、 反光镜等)。它使检视物放大,生成物象。 2.机械部分:镜座、镜臂、镜筒、物镜转换器、载物台、载物台转移器、粗调节器、细调节器等部件.它起着支持、调节、 固定等作用. 图1-1-2 光学显微镜的成像原理 倒立的虚像 显微镜的放大倍数和分辨率 1.放大倍数：物镜放大倍数×目镜放大倍数 2. 显微镜的分辨率:是表示显微镜辨析两点之间距离的能力。可用公式表示为： D=λ/2n·sin(α/2 ) 式中D：物镜分辨出物体两点间的最短距离。 ?：可见光的波长（平均0.55?m) n: 物镜和被检标本间介质的折射率。 ?：镜口角（即入射角）。 D值越小，分辨率越高，看到的物象越清晰 油镜使用的原理 油镜，即油浸接物镜。当光线由反光镜通过玻片与镜头之间的空气时，由于空气与玻片的密度不同，使光线受到曲折，发生散射，降低了视野的照明度。若中间的介质是一层油（其折射率与玻片的相近），则几乎不发生折射，增加了视野的进光量，从而使物象更加清晰。 根据公式D=λ/2n·sin(α/2 ) ，增大分母，使得D值减小，分辨率增大。 1.不准擅自拆卸显微镜的任何部件,以免损坏。 2.镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗布，以保证光洁度 3.观察标本时，必须依次用低、中、高倍镜，最后用油镜。当目视接目镜时，特别在使用油镜时，切不可使用粗调节器，以免压碎玻片或损伤镜面。 4.拿显微镜时，一定要右手拿镜臂，左手托镜座，不可单手拿，更不可倾斜拿。 5.油镜使用结束后，物镜用擦镜纸擦三遍：第一遍擦去多余的香柏油；第二遍擦镜纸蘸上二甲苯再擦镜头；第三遍再用干净的擦镜纸擦去多余的二甲苯。 6.显微镜应存放在阴凉用擦镜纸擦干燥处，以免镜片滋生霉菌而腐蚀镜片。 显微镜保养和使用中的注意事项 三.显微镜油镜观察操作方法 在高倍镜或低倍镜下找到要观察的样品区域后，然后将油镜转到工作位置。在待观察的样品区域滴加香柏油，从侧面注视，用粗调节器使油镜浸在镜油中并几乎与标本相接。然后用细调节器调节，在目镜下找到最合适的观察点。 油镜使用毕后：上升镜筒，取下载玻片，用擦镜纸拭去镜头上的镜油，然后用擦镜纸蘸少许二甲苯（香柏油溶于二甲苯）擦去镜头上残留的油迹，最后用干净的擦镜纸擦去残留的二甲苯。 本实验室按学号使用固定编号的显微镜，显微镜的保养由对应学号的