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第十三章 生物实验的基本技术 第一节 细胞学实验技术 例1 用显微镜观察洋葱根尖细胞的有丝分裂，要看清各时期细胞内染色体的变化情况，目镜、物镜的合理搭配应该是 A 目镜（24X）、物镜（10X，N·A0.25） B 目镜（ 5X）、物镜（40X，N·A0.65） C 目镜（10X）、物镜（40X，N·A0.65） D 目镜（24X）、物镜（40X，N·A0.65） 析 此题属镜像亮度问题。镜像亮度与物镜镜口率（N·A）平方成正比，与总放大倍数成反比。由此，在总放大倍数相同情况下，要使物像亮度增加，应该使用高镜口率（N·A）的物镜与低倍目镜配合，根据这一原理应选择C。 例2 在观察显微镜时，经常遇到以下5种现象：（1）视野亮度晃眼；（2）视野不圆；（3）对光时视野中出现窗棂、树影等物现象；（4）只见视野不见图像；（5）图像结构不完整，试分析出现这些现象的可能原因，并提出排除方法。 析 （1）视野亮度晃眼，可能原因：①反光镜直射强光源；②光照到通光孔上缘。排除方法：①用平面镜斜对光源；②挪镜。（2）视野不圆的可能原因：①遮光器或转换器没有转到头；②遮光器或转换器螺丝动。排除方法：①把两者转到头（弹簧片入槽）；②拧紧螺丝。（3）对光时视野中出现其他物象，其可能原因是镜筒太高或太低，调节一下镜筒即可消除。（4）只见视野不见图像，可能是操作不仔细，低倍镜头偏于一旁。排除方法：将低倍镜头对准通光孔。（5）图像结构不完整的可能原因是未根据材料的不同折光性用光，应调节光圈使透明度一致。 例3 某架显微镜由于磨损，低倍镜上的放大倍数看不清，而高倍物镜尚看得出是40倍，借助实验台上的哪些材料可帮你测出低信镜的放大倍数？说明测定方法。 （实验台上有显微镜、目镜测微尺、物镜测微尺、刻度尺、放大镜） 析 此题可利用显微测量技术测定。利用实验台上的显微镜和测微尺进行测量。由于目镜测微尺每格的实际长度因不同物镜的放大倍数有所不同，因此可以在相同目镜下，测量变换高（40X）、低倍物镜下的视野直径，由于放大倍数与视野直径成反比，按下式计算即可求出低倍镜的放大倍数。 高倍镜放大倍数 / 低倍镜放大倍数＝低倍镜视野直径 / 高倍镜视野直径 例4 在一黄粉岬幼虫尾部4～5节的节间刺一针，用毛细吸管取1～4mL血淋巴，再用毛细吸管取15～20mL生理盐水，用血球计数板计细胞数（区别脂类颗粒、组织碎片与细胞），计算血淋巴细胞浓度填入下表。30min重复一次（针刺部位前移一体节），60min重复一次（针刺部位再前移一体节）。 （1）将有关数据填入下表： 时间间隔 （min） 血淋巴长度 （a）mL 生理盐水 （b）mL 细胞数 （数25个中方格） 细胞密度 （个／mL） 0 30 60 （2）将细胞密度变化绘成曲线，并回答下列问题： ①计数时怎样处理压线细胞？用一句话回答。 ②给出计算细胞密度的公式。 ③用一句话回答为什么血盖片较一般盖玻片厚。 （注意：针刺幼虫时，食指与中指夹住头部，拇指按住尾部，使其不动。针刺不要过深，不要挑动，以免虫死亡或使头部器官的细胞或杂物进入血淋巴。虫不可死。） 析 此题按血球计数极计数的方法操作，所得数据镇入表中。根据绘制函数曲线原理，以时间间隔为横坐标，细胞密度（个／mL）为纵坐标，绘制曲线。在计数时，对压线细胞采取“数上线不数下线，数左线不数右线”的原则处理。计算细胞数方法： 每mL悬液细胞数＝80个小方格细胞总数 / 80×400×10000×稀释倍数 血盖片比普通盖玻片厚是因为要盖住计数板上的计数室沟槽。 【巩固练习】 1．某同学在做观察洋葱根尖细胞有丝分裂装片时，有两次出了差错。第一次是解离时间为2min，第二次是60min。请你推出实验结果并说明原因。第一次是因 ，所以观察到的是 。第二次，则因 ，所以 。 2．在照明充分的情况下，在显微镜视野内可看清洋葱鳞茎表皮细胞无色的细胞壁，但看不清液泡，为了能显示细胞质与液泡的界面，此时应 A 改用凹面反光镜，放大光圈 B 改用凹面反光镜，缩小光圈 C 改用平面反光镜，放大光圈 D 改用平面反光镜，缩小光圈 3．在显微镜视野中观察玻片标本，物镜测微尺和目镜（5X）测微尺在0点处重合时，物境测微尺的80格与目镜测微尺的55格处也相重叠时，试问目镜测微尺一格的长度是 μm；如观察测量某种植物的细胞大小时，测量其长为7个小格，那么此细胞的实际长度是 μm。 第二节 物理学和化学分析技术 【解题指导】 例1 叶绿体中色素的提取和分离： （1）提取和分离叶绿体的色素，可采用 方法。 （2）用毛细吸管在滤纸上划出滤液