《现代五分类血细胞分析仪的原理及使用》.ppt

现代五分类血细胞分析仪的原理及使用; 血液分析仪,临床血液一般检查最常用仪器。50年代，美国库尔特（W.H.Coulter）发明电子血细胞计数仪并申请专利。 1982 年，Technicon 公司生产了 H6000 型血液细胞，分析仪器，应该是首款具有白细胞五分类能力的仪器。同时代日本日立公司推出图像分析法的白细胞分析仪HITACHI 8200 型，仅仅是用于完成白细胞血片分类的仪器，没有其他血细胞计数分析能力。 ; 血液细胞分析仪是医院检验科、化验室的常规设备之一，也是发展最快、应用最普及的检验仪器，当前血液细胞分析仪分为三分群和五分类两种。国际市场上五分类血液细胞分析仪已经成为发达国家医院血液临床检验的主流产品，但由于五分类血液细胞分析仪需集光学、电子、气路、液路、计算机等技术于一体，技术含量非常高，纵观全球，也仅有美国、法国、日本等国家的 6 个厂家能够生产真正意义上的五分类血液细胞分析仪。 2006年 4 月深圳迈瑞 BC-5500推出之前，由于国内没有掌握该类产品生产制造的核心技术，因而在中国市场销售的该类产品由国外品牌所垄断，价格都比较昂贵，导致该类产品不能在中国医院临床检验中大范围推广应用，BC-5500 的推出推动了五分类血液细胞分析仪在国内的临床应用，提高整个国内血液细胞检测的临床应用水平。 ;一、常见血细胞分析仪品牌;二、五分类血细胞分析仪的检测原理;（二）、分类计数的基本原理;血细胞五分类技术是一种综合应 用光学、机械学、流体力学、电子计算机、细胞生物 学、免疫学等学科技术，让被测溶液流经测量区域 并逐一检测其中每一个细胞的物理和化学特性从而对 高速流动的细胞或亚细胞进行快速定量测定和分析的 方法。它一秒钟能分析几千个细胞，并同时测定细胞 的多个参数。阻抗法也在五分类血细胞仪中被采用，即所谓的鞘流阻抗法。 ;1、电阻抗原理，又称库尔特原理;鞘流技术联合电阻抗的应用;2、激光技术、射频技术、组织化学技术的应用;在激光技术中目前有半导体激光和气体激光。半导体激光功率弱,但作为细胞分类自己足够;气体激光功率强。二者比较半导体激光具有寿命长(7~10年)体积小,启???快,耗电小,对稳压要求低,更为经济适用等特点。;（1） 电阻抗、高频电导及激光散射联合检测法 即库尔特公司的VCS技术。 V:代表体积容量。电阻法微孔技术应用于计数血细胞和测定其体积的大小。 C:代表传导性即电导(conductivity),指一束电磁波或称射频,穿透细胞的传导性,它取决于细胞的大小和内部结构;经校正后的传导性叫opacity即“不透明性”,这时不再反映细胞大小,而是反映细胞内部的结构,像核的大小,核浆比例和密度等。 S:代表散射(scatter),指在不同角度测得的散射光强度。由于各类细胞的表面结构不同和颗粒大小不同而对光的散射各异,进而区分各类细胞。;容量、电导、光散射（volume，conductivity， scatter, VCS）法;;VCS可显示3种细胞散点图 DF1（体积值和散射光值） DF2（体积值和电导值） DF3（体积值和电导值）;仪器在单一通道上同时用这三种方法对同一白细胞进行测量,避免了有些血液分析仪要设计好几个通道或加染色试剂的麻烦。 采用VCS技术的仪器主要是Coulter公司的STKS型、MAXM型以及Gen.s型五分类血液分析仪。MAXM型和Gen.s型可计数网织红细胞,Gen.s型可选配自动制血片机。以上几种型号还可直接计数CD4和CD8淋巴细胞,并算出其比率。 ;（2）光散射和细胞化学染色联合应用;白细胞化学染色 在稀释液中加入过氧化酶(MPO)的底物及显色剂,根据白细胞对MPO的反应分类。中性细胞MPO为强阳性,嗜酸性细胞阳性更强,单核细胞为弱阳性,淋巴细胞阴性,嗜碱性细胞亦为阴性,故综合光散射和细胞化学染色的特点, 可得到二维或三维图像-----不同颜色的散点图。由于嗜碱性细胞不含此酶,不能被检测,因此一些仪器专门设置了嗜碱性细胞检测系统,它的测量通道采用时间差的方法,与RBC、PLT的测量系统共用一个通道。;（3）电阻抗和射频电导联合检测法;②嗜酸性细胞和嗜碱性细胞两种检测系统:在细胞悬浮液中加入特殊的溶血剂,除嗜酸性细胞和嗜碱性细胞外,其他细胞均被溶解或萎缩再对保持完整的嗜酸性细胞或嗜碱性细胞进行计数。 ③幼稚细胞检测系统:在细胞悬浮液中加入硫化氨基酸,由于占位不同,结合在幼稚细胞的氨基酸比成熟细胞多,且对溶血剂有抵抗作用,当加入溶血剂时,成熟细胞被溶解,只保留着可能存在的幼稚细胞用来计数。Sysmex公司的SE-9000血细胞分析仪就是采用这种方法进行五分类的。;电阻抗与射频法能透入细胞内，测量核的大小及颗粒的多少。 ;（4） 多角度激光偏振光散射检测法;