gpd的临床生化化学检测课件.pptx

;目 录 一、G6PD与G6PD缺乏症 二、G6PD的发病机制 三、G6PD的流行病学与遗传规律 四、G6PD临床生物化学检测 五、华南常见G6PD试剂盒的概况 六、美康G6PD调试经验 七、案例分享;一、G6PD与G6PD缺乏症;二、G6PD的发病机制;磷酸戊糖途经;谷胱甘肽还原型+氧化性物质 谷胱甘肽氧化型;三、G6PD的流行病学与遗传规律;四、G6PD临床生物化学检测;2、G6PD的检测方法 2.1 比色法（生化仪） G6PD 活性校正值测定 原理：红细胞G6PD 催化G6P 生成6-磷酸葡萄糖内脂，后者很快氧化成6-磷酸萄糖酸(6-PGA) ，同时NADP 被还原成NADPH 。在340 nm 处监视NADPH 吸光度的升高，计算酶的活性。红细胞中还含有6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶( 6PGD)，催化6-PGA 脱羧，生成核酮体糖-5-磷酸，同时使辅酶NADP 还原成NADPH。在本测定系统中，由6-PGA和G6 P 组成的底物系统，测得的酶活性，减去单独以6-PGA 为底物时测得的酶活性，代表真正G-6-PD 的活性。本法测定包含如下2 个反应式: （1）G6P+ NADP+ 6PGA+NADPH+H+ (2) 6PGA+NADP+ R-5-P+NADPH+H++CO2 ;血红蛋白测定 氰化高铁血红蛋白测定法 原理： 血液在Hb转化液中溶血后，除SHb外各种Hb均可被高铁氰化钾氧化为高铁Hb再与CN-结合生成稳定的棕红色氰化高铁Hb。HiCN最大波峰在540nm,最小吸收峰为504nm。特定标准条件下，毫摩尔消光系数为44L·mmol－1·cm。因此，根据标本的吸光度，即可测定Hb浓度。 HiCN 试剂: 氰化钾(KCN) 高铁氰化钾 无水磷酸二氢钾 特别提醒：该法是测定血红蛋白的标准方法，但是试剂中含有氰化钾剧毒物，操作时必须小心。实验后的废液也要小心处理。 ;G6PD活力计算： ?G6PD=(G6PD+6PGD )—6PGD (U/L) G-6-PD , U/g Hb= ?G6PD/Hb 意义：每克血红蛋白中G6PD的活性 参考值： 健康成年人，红细胞G6PD 活性(己校正 6-PGD) 8.34±1.59 U/g Hb 红细胞活6PGD性为6.8 - 12.0U/g Hb 注意一：NADPH比值法或G6PD/6GPD法，在上面基础上不采用两个指标相减，而是相除，原理是6GPD尚未报道在G6PD??者和正常人之间有差异，通过比值法筛查，一定程度上可以确认女性杂合子，也就是G6PD基因缺陷携带者。此法受到一些试剂厂家和医院青睐。 ;G6PD 活性直接测定法 G6PD 活性校正值测定虽然能提供G6PD 活性真值和6GPD的活性，但在溶血性疾病的检查中尚未发现红细胞6PGD活性正常而掩盖G6PD活性缺乏的现象。因此，就临床使用而言，G6PD活性的的简易测定法己能满足临床。 原理：G6P+ NADP+ 6PGA+NADPH+H+ 在波长340 nm 处监测NADPH 的吸光度增高，计算G6PD活性。 活性计算： G-6-PD , U/g Hb= G6PD/Hb 参考值：健康成年人，红细胞G6PD 活性为8 -18 U/g Hb 。 注意：医院可以根据需要决定是否需要6PGD校正。;其他方法： 2.2高铁血红蛋白还原试验: 2.3免疫斑点杂交法： G6PD活性测定注意事项： 1、Mg2+是G6PD的激活剂，铜离子和锌离子有轻度抑制作用，汞离子和对氯汞苯甲酸有完全抑制作用，因此日常使用中尽量避免抑制剂的污染。 2、避免样本溶血，样本溶血后G6PD活性不稳定，影响其活性测定。溶血后活性降低很快，25min内需要及时测定。 ;五、华南常见G6PD试剂盒概况;不同厂家试剂盒比较;长春汇力与以上有所区别，具体如下： 全血G6PD: 638-1980U/L 4.2-14.5U/gHb 脐带血或末梢血G6PD：832-2460U/L 4.9-14.5U/gHb 血清G6PD：0-5U/L 北京利德曼对参考值