还原糖和总糖的测定方法.pdfVIP

还原糖和总糖的测定——3,5-二硝基水杨酸比色法 一、材料、主要仪器和试剂 1、材料 小麦面粉；精密pH 试纸。 2 、主要仪器 （1）具塞玻璃刻度试管：20mL×11 （2 ）大离心管：50mL×2 （3 ）烧杯：100mL×1 （4 ）三角瓶：100mL×1 （5 ）容量瓶：100mL×3 （6 ）刻度吸管：1mL×1；2mL×2 ；10mL×1 （7 ）恒温水浴锅 （8）沸水浴 （9 ）离心机 （10）分光光度计 3、试剂 （1）1mg/mL 葡萄糖标准液 准确称取 80℃烘至恒重的分析纯葡萄糖 100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解 后，转移到100mL 容量瓶中，用蒸馏水定容至100mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。 （2 ）3,5-二硝基水杨酸（DNS ）试剂 将6.3gDNS 和262mL2MNaOH 溶液，加到500mL 含有185g 酒石酸钾钠的热水溶液 中，再加5g 结晶酚和5g 亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000mL，贮于棕色 瓶中备用。 （3 ）碘-碘化钾溶液：称取5g 碘和10g 碘化钾，溶于 100mL 蒸馏水中。 （4 ）酚酞指示剂：称取0.1g 酚酞，溶于250mL70% 乙醇中。 （5 ）6MHCl 和6MNaOH 各100mL。 二、操作步骤 1．制作葡萄糖标准曲线 取7 支20mL 具塞刻度试管编号，按表1 分别加入浓度为1mg/mL 的葡萄糖标准液、蒸 馏水和3,5-二硝基水杨酸（DNS ）试剂，配成不同葡萄糖含量的反应液。 表1 葡萄糖标准曲线制作 管号 1mg/mL 葡萄糖标准液 蒸馏水 DNS 葡萄糖含量 光密度值 （mL ） （mL ） （mL ） （mg ） （OD540nm ） 0 0 2 1.5 0 1 0.2 1.8 1.5 0.2 2 0.4 1.6 1.5 0.4 3 0.6 1.4 1.5 0.6 4 0.8 1.2 1.5 0.8 5 1.0 1.0 1.5 1.0 6 1.2 0.8 1.5 1.2 将各管摇匀，在沸水浴中准确加热5min，取出，冷却至室温，用蒸馏水定容至20mL， 加塞后颠倒混匀，在分光光度计上进行比色。调波长 540nm，用0 号管调零点，测出 1~6 1 号管的光密度值。以光密度值为纵坐标，葡萄糖含量（mg ）为横坐标，在坐标纸上绘出标 准曲线。 2 ．样品中还原糖和总糖的测定 （1）还原糖的提取 准确称取3.00g 食用面粉，放入100mL 烧杯中，先用少量蒸馏水调成糊状，然后加入 50mL 蒸馏水，搅匀，置于50℃恒温水浴中保温20min ，使还原糖浸出。将浸出液（含沉淀） 转移到50mL 离心管中，于4000r/min 下离心5min，沉淀可用20mL 蒸馏水洗一次，再离心， 将二次离心的上清液收集在 100mL 容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，混匀，作为还原糖待 测液。 （2 ）总糖的水解和提取 准确称取 1.00g 食用面粉，放入 100mL 三角瓶中，加 15mL 蒸馏水及 10mL6MHCl， 置沸水浴中加热水解30min （水解是否完