固定化酶和固定化细胞[借鉴].pptVIP

固定化酶的稳定性 操作稳定性：体内半衰期 贮藏稳定性：低温放置 热稳定性：耐热性提高 对蛋白酶的稳定性：空间位阻 其他：对有机溶剂、pH、酶抑制剂等的稳定性均有提高。 * 精品PPT·值得借鉴 固定化酶的酶学特性 底物特异性：对高分子底物的活性明显下降； 最适pH：最适pH和pH曲线常会发生偏移； 最适温度：多数较游离酶高； 动力学常数：Km均增大，增大幅度视情况而定； 最大反应速度：与游离酶大多数是相同或相近。 * 精品PPT·值得借鉴 酶反应器及其类型 酶反应器的定义 以酶为催化剂进行反应所需要的设备称之为酶催化反应器，简称酶反应器。 * 精品PPT·值得借鉴 酶反应器的类型 间歇式搅拌罐反应器，BSTR 连续流动搅拌罐反应器，CSTR 填充床反应器，PBR 流化床反应器，FBR 连续搅拌罐-超滤膜反应器，CSTR/UFR 循环式反应器，RCR * 精品PPT·值得借鉴 反应器的结构特点 从目前的发展状况来看，尽管酶种类繁多，但已经固定化的酶却相对有限，采用固定化酶技术大规模生产的企业尚属少数，真正在工业上使用的固定化酶还仅限于葡萄糖异构酶、葡萄糖氧化酶和青霉素酰化酶等为数不多的十几个酶种，故仍需大力研究开发使更多的固定化酶和细胞能适用于工业规模生产。 发展现状 * 精品PPT·值得借鉴 固定化酶的优点 同一批固定化酶能在工艺流程中重复多次地使用； 固定化后，和反应物分开，有利于控制生产过程，同时也省去了热处理使酶失活的步骤； 稳定性显著提高； 可长期使用，并可预测衰变的速度； 提供了研究酶动力学的良好模型。 * 精品PPT·值得借鉴 固定化酶的制备原则 （1）必须注意维持酶的构象，特别是活性中心的构象。 （2）酶与载体必须有一定的结合程度。酶的固定化既不影响酶的原有构象，又能使固定化酶能有效回收贮藏，利于反复使用。 （3）固定化应有利于自动化、机械化操作。这要求用于固定化的载体必须有一定的机械强度，才能使之在制备过程中不易破坏或受损。 * 精品PPT·值得借鉴 （4）固定化酶应有最小的空间位阻。 （5）固定化酶应有最大的稳定性。在应用过程中，所选载体应不和底物、产物或反应液发生化学反应。 （6）固定化酶的成本适中。 * 精品PPT·值得借鉴 固定化酶（细胞）的制备方法 酶和细胞固定化方法 载体结合法 交联法 包埋法 网格型 微囊型 物理吸附法 离子结合法 共价结合法 热处理（细胞） * 精品PPT·值得借鉴 * 精品PPT·值得借鉴 1、吸附法 通过载体表面和酶分子表面间的次级键相互作用而达到固定目的的方法，是固定化中最简单的方法。 吸附法又可分为物理吸附法和离子吸附法。 * 精品PPT·值得借鉴 物理吸附法(physical adsorption)是通过非特异性物理吸附作用将酶直接吸附在水不溶性载体表面上而使酶固定化的方法。包括范德华力、疏水相互作用、氢键。 物理吸附法常用的载体： 有机载体：纤维素、胶原、淀粉及面筋等； 无机载体：活性炭、氧化铝、皂土、多孔玻璃、硅胶、二氧化钛、羟基磷灰石等。 物理吸附法 * 精品PPT·值得借鉴 离子吸附法(ion adsorption)是通过离子键使酶与含有离子交换基团的水不溶性载体相结合的固定化方法。 此法固定的酶有葡萄糖异构酶、糖化酶、β-淀粉酶、纤维素酶等，在工业上用途较广。 离子吸附法 * 精品PPT·值得借鉴 离子吸附法常用的载体： 阴离子交换剂：DEAE-纤维素、四乙氨基乙基(TEAE)-纤维素等； 阳离子交换剂有羧甲基(CM)-纤维素、纤维素柠檬酸盐、Dowex-50等。 其吸附容量一般大于物理吸附剂。离子吸附法具有操作简便、条件温和、酶活力不易丧失等优点。此外，吸附过程同时可以纯化酶。 * 精品PPT·值得借鉴 2、包埋法 包埋法（entrapment）是将酶包埋在高聚物的细微凝胶网格中或高分子半透膜内的固定化方法。前者又称为凝胶包埋法，酶被包埋成网格型；后者又称为微胶囊包埋法，酶被包埋成微胶囊型。 * 精品PPT·值得借鉴 （1）凝胶包埋法 将聚合物的单体与酶溶液混合，再借助于聚合促进剂(包括交联剂)的作用进行聚合，酶被包埋在聚合物中以达到固定化。 凝胶包埋法常用的载体有海藻酸钠凝胶、角叉菜胶、明胶、琼脂凝胶、卡拉胶等天然凝胶以及聚丙烯酰胺、聚乙烯醇和光交联树脂等合成凝胶或树脂。 * 精品PPT·值得借鉴 （2）微胶囊包埋法 微胶囊包埋即将酶包埋在各种高聚物制成的半透膜微胶囊