生物化学：测验二答案-20141125.docVIP

PAGE PAGE 3 药学院13级本科生“生物化学”测验（二）参考答案 2014. 11. 25上午第二节课 考试内容：酶、核酸 考试方式：开卷，独立完成 1. 请判断下列说法是否正确，并说明理由： （15分） （1）在酶的活性中心，只有带电荷的氨基酸残基直接参与酶的催化作用。 （2）别构酶不仅含有活性部位，而且含有调控部位。别构效应的特点是负调控而不表现正调控。 （3）与mRNA中的ACG密码子相对应的tRNA反密码子是UGC。 答：（1）错（3分）。酶的活性中心参与酶的催化作用的不仅是带电荷的氨基酸胺残基，一些极性基团、非极性基团通过氢键、疏水作用等相互作用力也能参与酶的催化作用。（2分） （2）错（3分）。别构酶不仅含有活性部位，而且含有调控部位。别构效应是指非底物分子通过结合别构酶的调控部位对酶活性的调控作用。别构效应不仅有抑制调控（负调控）而且也有激活调控（正调控）。（2分） （3）错（3分）。碱基顺序的阅读方向是5′?3′，由于密码子与反密码子成互补和相反方向的关系，因此与mRNA中的ACG密码子相对应的tRNA反密码子应该是CGU（2分）。 2. 某酶的初提取液经过一次纯化后，经测定得到下表所示的数据。试计算纯化前后的比活力，提纯倍数、蛋白酶回收率以及酶的回收率。 （15分） 体积（mL） 活力单位（U/mL） 蛋白质（mg/mL） 初提取液 100 200 10 硫酸铵盐析 5 800 4 答： （1）纯化前比活力为：（200 × 100）÷（10 × 100）= 20 (U/mg) （3分） 纯化后比活力为：（800 × 5）÷（4 × 5）= 200 (U/mg) （3分） （2）纯化倍数为： QUOTE 250μg?min-1?mg （3）蛋白的回收率为：（4 × 5）÷（10 × 100）= 2% （3分） （4）酶的回收率为：（800 × 5）÷（200 × 100）= 20% （3分） 3. 如何解释酶活性与pH的关系？假如其最大活性在pH = 4或pH = 11时，酶活性可能涉及哪些氨基酸残基？ （15分） 答：酶的活性基团常常是一些可以解离的基团，这些基团的解离受pH影响，而底物分子有的也能解离，其解离状态也受pH的影响。（4分）在某一pH下，二者的解离状态最有利于它们的结合，酶促反应表现出最大活力，次pH称为该酶的最适pH。（3分）当反应pH偏离最适pH时，酶促反应的速率就会显著下降。（2分）如果某酶最大活性在pH = 4，说明其活性基团是一些酸性氨基酸残基，如Glu, Asp。（3分）如果某酶最大活性在pH = 11，说明其活性基团是一些碱性氨基酸残基，如Lys, Arg。（3分） 4. 当抑制剂能选择性地与酶的活性部位的氨基酸残基共价结合时，则能帮助鉴别酶，我们称这类抑制剂为亲和标记试剂。已知TPCK是胰凝乳蛋白酶的亲和标记试剂，它通过使蛋白质活性中心的His残基烷基化而使酶失活。（1）试通过分析，为胰蛋白酶设计一个类似TPCK的亲和标记试剂。（2）你如何检验该试剂的专一性？ （15分） 答：（1）亲和标记试剂有两个特点：①结构与底物类似，却不被酶作用，在TPCK分子中对应的是对甲苯磺酰-苯丙氨酰部分；（2分）②有活泼的化学基团，可以与靶酶的活性部位的某个氨基酸残基反应。在TPCK分子中对应的反应基团是-CH2Cl。（2分）胰蛋白酶活性中心有一带负电荷的Asp，可选择性地结合带正电荷的Arg和Lys残基。（2分）由以上分析可知：为胰蛋白酶设计一个类似TPCK的亲和标记试剂，可以将TPCK中的反应基团-CH2Cl和类似肽键的结构-NH-CH-CO-保留，苄基部分更换为Lys或Arg的侧链基团即可。（5分） （2）检验该试剂的专一性，实际上就是分析其与酶的竞争性结合能力。可以设计动力学实验，分析没有抑制剂和有不同抑制剂存在时反应速率随底物浓度的变化。求出酶的抑制常数。（4分） 5. 请画出以下的两种修饰碱基，在碱基互补配对时，与其配对碱基通过氢键形成的配对物的结构。并分析当这两种碱基掺入正常DNA转录过程时，其蛋白质产物可能发生的变异情况。 （20分） 答：配对的碱基对结构： 5