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山东大学实验报告 2015 年 3 月 5 日 姓名 班级 13 级生命基地班 学号 同组者： 科目 细胞生物学实验 实验题目 动物细胞融合 【实验题目】 动物细胞融合 【实验目的】 1. 了解动物细胞融合的常用方法。 2. 学习化学融合的基本操作过程。 3. 观察动物细胞融合过程中细胞的行为与变化。 【实验材料与用品】 1 、材料 鸡血红细胞 2 、试剂 50%PEG 、GKN溶液、 Alsever ’s 细胞保存液、 0.85%氯化钠溶液。 3 、 器材 倒置显微镜、离心机、载玻片、盖玻片、离心管、废液缸、滴管等。 【实验原理】 细胞融合是指在自发或者诱导条件下， 两个或两个以上细胞合并为双核或者多核细胞的 过程。目前人们已经发现有很多方法可以诱导细胞融合，包括：病毒诱导融合、化学诱导融 和和电激诱导融合。 1、病毒诱导融合 仙台病毒、 牛痘病毒、 新城鸡瘟病毒和疱疹病毒等可以介导细胞的融时也可介导细胞与 细胞的融合。用紫外线灭活后，这些病毒即可诱导细胞发生融合。 2、化学诱导融合 很多化学试剂能够诱导细胞融合，如聚乙二醇 (PEG)、二甲基亚砜、山梨醇、甘油、溶 血性卵磷脂、磷脂酰丝氨酸等。这些物质能够改变细胞膜脂质分子的排列，在去除这些物质 之后，细胞膜趋向于恢复原有的有序结构。在恢复过程中想接触的细胞由于接口处脂质双分 子层的相互亲和与表面张力，细胞膜融合，胞质流通，发生融合。化学诱导方法，操作方便， 诱导融合的概率比较高，效果稳定，适用于动、植物细胞，但对细胞具有一定的毒性。 PEG 是广泛使用的化学融合剂。 3、电激诱导融合 第 1 页 共 16 页 微生物实验报告 山东大学实验报告 2015 年 3 月 5 日 姓名 班级 13 级生命基地班 学号 同组者： 科目 细胞生物学实验 实验题目 动物细胞融合 包括电诱导、激光诱导等。其中，电诱导是先使细胞在电场中极化成为偶极子，沿电力 线排布成串，再利用高强度、短时程的电脉冲击破细胞膜，细胞膜的脂质分子发生重排，由 于表面张力的作用，两细胞发生融合。电诱导方法具有融合过程易控制、融合概率高、无毒 性、作用机制明确、可重复性高等优点。 【实验步骤 】 在本次实验中采用的是化学诱导融合的方法， 利用 PEG使鸡血红细胞发生融合。 具体实 验步骤如下： 1、取鸡血 2ml+2mlAlsever 液，再加入 6mlAlsever 液，混匀后制悬液（ 4 ℃保存）【老师已 做好，可直接使用】 2、取（ 1）中悬液 1ml+4ml 的 0.85%的 NaCl 溶液，进行以下三次离心处理： 在 1200r/min 下离心 5min，去掉上清液，再加入 0.85%的 NaCl 溶液至 5ml； 1000-1200r/min 下离心 5min，去掉上清液，再加入 0.85%的 NaCl溶液至 5ml； 1000-1200r/min 下离心 7min 【因时间关系此次实验只离心一次】 3、 将离心后的沉降血球（去上清后约 0.1-0.2ml ）加入 GKN至 1-2ml ，使之成为 10%的细胞 悬液； 4、 取上述 10%的血球悬液 1ml, 加入 3mlGKN液，使每毫升含血球 个； 5、分别取（ 4）1ml+0.5ml50%PEG，（4 ）0.5ml+0.5ml50%PEG，（4 ）0.5ml+1.0ml50%PEG， 混匀滴片，编号分别为 号溶液。在常温下 2-3min 后，显微镜下观察。 【实验结果 】 1、