生物化学：10测验二答案.docVIP

PAGE PAGE 1 药学院10级本科生“生物化学”测验（二）答案 2011. 11. 3上午 考试内容：蛋白质的性质、蛋白质的分离纯化与鉴定、酶 考试方式：开卷，独立完成 班级： 姓名： 学号： 成绩： 1. 请根据下列各题具体情况从我们所学的分离分析方法中选择合适的，并简述其分离原理。 (20分) （1）既可以分离蛋白质，又可以测定相对分子量的方法； （2）5mL待处理样品中蛋白含量较低，且存在有机小分子杂质，需要进行分离和浓缩。 （3）一个蛋白质混合物有下面几种不同的组分：a. Mr = 12 KD, pI = 10; b. Mr = 62 KD, pI = 10; c. Mr = 28 KD, pI = 7; 答：（1）密度梯度离心法：此法的分离原理是根据不同的蛋白质颗粒因其大小和密度不同，在一定离心速度下的沉降速率不同，进而在密度梯度介质中得到分离，通过获得的标准曲线，即可测得相对分子量。（答凝胶过滤法也可以） （2）超滤法：由于样品处理量不多，可选用此法。此法使用超滤用离心管，在离心下，小分子杂质和缓冲液透过过滤膜被分离出去，达到分离小分子杂质和浓缩的目的。 （3）凝胶过滤法：此法根据蛋白质相对分子量不同，在装有凝胶介质的柱子中的移动速度不同，进而达到分离的目的。依据题意，流出先后顺序应为：bca。 2. (1) 根据米式方程求Kcat为30 s-1，Km为0.005 M的酶，在底物浓度为多少时，酶促反应的速度为1/4 Vmax (2) 从肝细胞中提取的一种蛋白水解酶的粗提液300 mL含有150 mg蛋白质，总活力为360单位。经过一系列纯化步骤以后得到4 mL酶制品（含有0.8 mg蛋白），总活力为288单位。整个纯化过程的收率是多少？纯化了多少倍？ （20分） 答：（1）由v = (Vmax × [S])/( Km + [S]) = 1/4 Vmax，可以推算出： [S] = Km /3 = 1.667 mM （2）回收率 = (288/360) × 100% = 80% 提纯倍数 = (288/0.8) ÷ (360/150) = 150（倍） 3. 黄嘌呤氧化酶是核酸代谢中一个非常重要的酶，它的异常活化将导致体内尿酸水平的升高，进而会引起痛风。请根据下面结构，推断临床上使用的药物别嘌呤醇（allopurinol）可能的抑制作用机理。 （10分） 答：根据黄嘌呤氧化酶 答：根据黄嘌呤氧化酶的底物结构和别嘌呤醇结构非常相似这一特点，可以推断该药物可能是通过竞争性抑制作用起到治疗痛风的作用。 4. Describe the biochemical principles behind the use of the peptidases pepsin（胃蛋白酶）and papain（木瓜蛋白酶）as meat tenderizers （嫩肉剂）. （10分，用英文回答，加2分） 答：胃蛋白酶和木管蛋白酶可将肉类中较长的纤维状蛋白质分子中的一些肽键切断，从而形成较小肽段的分子，致使肉类制品滑嫩可口。 5. 碳酸酐酶（carbonic anhydrase）中的金属离子Zn2+的作用是什么？是用哪些方法确定它的作用机理的？请简述之。 （15分） 答：（1）碳酸酐酶中Zn2+的作用是活化水，提高水的亲核作用。 （2）确定Zn2+的作用所用的方法和获得的结论如下： X-单晶衍射分析 活性部位Zn2+的存在 pH对酶活力影响实验 确定Zn2+对水的活化作用 Zn2+配合物仿酶化学模型研究 进一步确立Zn2+在催化反应方面的作用 6. 下面的反应被酯水解酶催化水解，回答下列问题 （25分） 完成上述反应式。 试设计两个该酶的竞争性抑制剂，画出它们的结构，并说明设计原理。 如果该酶的活性中心有一丝氨酸残基，什么样的分子可以作为该酶的不可逆抑制剂？试画出一个你知道的分子的结构。 答：（1） （2） 这两个分子均具有可与酶识别的羰基，分子大小接近，当并没有能被水解的酯基，因此会与底物竞争与酶活性中心的结合。 （3）那些能