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柠檬酸发酵工艺 合合合命合合合合合合合合合合合合合命合合合合自  柠檬酸发酵工艺 工艺流程 试管培弊 干碎浆 压机 麩曲三角瓶培养 贮气 种罐培养 液化 过滤器 酸解脱色 树助净化下[浓结品 干燥 图10-2萼干原料深层发醪生产柠檬酸流程图  柠檬酸发酵工艺 试管斜面菌种培养 察氏琼脂培养基:NaNO3g,蔗糖 20g, K2HPO4 Ig, KCI 0.5g, MgSO4.7 H,O05g, FeSO4001g,琼脂20g,用水定溶至1000ml,pH自 然 察氏多氏琼脂培养基:蔗糖30g, NaNO3 2g, MgSO47H,O 0.5g, KH PO4 Ig, KClO 5g,FeSO4H2O0.0lg,溴甲分绿0.4g,琼脂 20g,蒸馏水1000ml,pH自然。  1、试管斜面菌种培养 蔗糖合成琼脂培养基:蔗糖140g,NHNO32g, KH, PO4 2g, MgSO47H2O 0.25g, FeCl3. 6H2O 0.02g ,MnSO4H2O0.02g,麦芽汁20ml,琼脂20g,用 水定溶至1000ml 米曲汁琼脂培养基:一份米曲加四倍质量的水 于55℃保温糖化3-4小时后煮沸,滤液用水调整浓度 至10Bx,并用碱液将pH调制到60,接着添加琼脂 2%。确认所制成的斜面无杂菌污染后,接入黑曲霉 孢子悬液0.1ml,于32℃培养4~5d。  2、种子扩大培养 ①二级扩大培养 a培养基 有琼脂固体培养和液体表面培养两种方法,前 者的培养基组成与斜面培养基相同,后者的组成 如下:麦芽汁7BX,氯化铵2%,尿素0.1%  2、种子扩大培养 ①二级扩大培养 b培养 ■固体培养时,500ml茄子瓶装80ml琼脂培养基 5oml茄子瓶装50ml琼脂培养基。灭菌后摆成斜面, 凝疑固后的斜面至37℃下培养24h。确认无杂菌污染 即可使用 ■液体培养时,将液体培养基装入三角瓶中,使液层 深度达45cm,于0.IMPa下湿热灭菌15min。按无菌 操作接种。培养温度32℃。液体表面需7~10d,琼 脂固体培养需6~7d  ②三级扩大培养 可采用麸曲固体培养、液体表面培养或琼脂 固体培养。 听用培养基如下: a麸曲培养基 新鲜小麦麸皮1kg,加水1.1~1.3L。液体培养基与 第二级扩大培养基所用液体培养基相同 b琼脂固体培养基: 与斜面培养基相同。  3、发酵生产 ■柠檬酸发酵是典型的好氧发酵,工业上好氧发酵基 本上有三种,即表面发酵、固体发酵和液体深层发 酵。前两者是利用气相中的氧,后者是利用溶解氧。 这三种发酵方法都各有优缺点和经济可行性,工业 上仍然在使用。  ①柠檬酸的液体深层发酵工艺 用液体深层发酵罐从罐底部通气,送入的 空气由搅拌桨叶分散成微小气泡以促进氧的溶 解。这种由罐底部通气搅拌的培养方法,相对 于由气液界面靠自然扩散使氧溶解的表面培养 法来讲,称为深层培养法。 特点是容易按照生产菌种对于代谢的营养要求 以及不同生理时期的通气、搅拌、温度、与培 养基中氢离子浓度等条件,选择最佳培养条件  ①柠檬酸的液体深层发酵工艺 1)发酵温度 黑曲霉发酵柠檬酸温度控制在28~30℃,柠檬酸 率最高,发酵速度较快,超过35℃时,虽然初 期产酸较快,但最终的发酵产率降低15%以 为了节约降温能耗,我国成功培育出高温发酵的 酸微生物,可以在37℃发酵 p 在薯干粉发酵柠檬酸中,初始pH不加调节 约5.5。当接入菌种后,菌种生长繁殖,消耗氮 源和铵离子,使培养基的PH下降,前期pH下降较 快,活力强的菌种微生物培养12h后,ph可以降 至2.5-3.0 时后可以降至2.2-2.3,这时会 有少量的柠檬酸产生,但要到48小时后柠檬酸才 大量 才使pH下降至2.0以下。