细胞培养前准备.pptVIP

实验总体安排 细胞培养的基本技术 实验前准备 细胞传代 细胞冻存与复苏 细胞计数与接种孔板  二,专题 1.细胞生长曲线:MTT实验 细胞凋亡:JC-1检测线粒体膜电位 3.免疫荧光技术:核蛋白(PCNA)的免疫荧 光 4.流式细胞仪的应用:细胞周期的检测 5.电镜  细胞培养实验器材准备  目前多数的实验室还达不到用后即弃的条 件,常要反复使用一些器皿,在组织细胞 培养中器材的清洗、消毒灭菌仍是重要环 节,而且工作量很大,是一项繁重而艰苦的 工作,其主要目的是去除器皿上杂质及其对 细胞生长有影响的物质及各种微生物  玻璃器皿的处理 玻璃器皿用于培养细胞、细胞冻存、培养用液的 存放等。提供细胞生长的玻璃表面不但要清洁干 净,而且要带适当电荷。苛性碱清洗剂会使玻璃 表面带的电荷不适于细胞附着,需以HCL或 H2SO4中和。清洗玻璃器皿不仅要求于净透明 无油迹,且不能残留任何毒性物质。为了保证清 洗的质量,一般玻璃器皿的处理分为六个个步骤 浸泡,刷洗,浸酸,冲洗,包装,消毒灭菌  浸泡:新的玻璃器皿首先用清水浸泡及简单刷 洗以便去除玻璃器皿表面的灰尘和软化溶解附 着物,新购的玻璃器皿表面常呈碱性,并带有 许多干涸的灰尘和一些对细胞有毒的物质(如 铅,砷等)。然后用5%稀盐酸溶液中浸泡过夜, 中和其中的碱性物质。使用过