分子生物学-08-1-第三章生物信息的传递-3转录后加工-小RNA-RNA拼接1.docVIP

PAGE 郜刚分子生物学教案 教学单元教案格式 8 第3章 转录（之转录后加工-小RNA-RNA拼接1） 课程教案 授课题目：第3章 转录 转录后加工-小RNA-RNA拼接1 第四周 第二次课 教学时数： 2 授课类型： eq \o\ac(□,√) 理论课 □ 实践课 教学目的、要求： 理解：真核生物mRNA前体的加工 了解：细胞内的RNA组分 小RNA的功能研究进展 教学重点： 重点阐明：内含子的剪接 重点指出：原核生物RNA与真核生物RNA加工的本质区别 教学难点： 绝对难点：内含子的剪接方式 相对难点：无 教学方法和手段： 老师讲授为主：讲授 视频演示 PPT演示 讨论。以电脑幻灯片边演示边讲述为主，（白板课件）辅以板书（黑板板书） 学生回答问题为辅：（如时间等条件许可的情况下） 注：以下内容按实际需要进行取舍 要求有多媒体，因为信息量大，许多结构图需要媒体放映，效果才好 教学内容与教学设计： 由于本课涉及到大量乃含子的剪接方式，而这些东西又是比较新的，同时是各个大学考研的热点，所以本课增加一些这方面的最新进展，并不完全按照教材的安排进行。 另外更重要的是，在细胞表达的RNA中除了我们熟悉的3类RNA之外，还有大量的不编码蛋白质的非编码RNA，即在细胞表达的RNA中，除了我们所熟悉的3类RNA外， 还有大量的不编码蛋白质的非编码RNA分子(noncoding RNA，ncRNA)，调控真核细胞中的许多功能，影响基因表达、细胞周期调控和个体发育等多种行为，这使科学家对细胞及其进化的看法进行重新反思。小RNA是2l一28 nt的调控RNA分子，主要包括微RNA(micro RNA，miRNA)和小干涉RNA(short interfering RNA，siRNA)两类，其中的miRNA成为继siRNA之后新的研究热点之一，名列2002年和2003年美国《科学》杂志评出的年度十大科学成就。miRNA是microRNA(微RNA)的简称，它是小的调节植物和动物生长、发育的RNAs，是由非蛋白编码基因转录物形成的茎环结构加工而来的长度在22 nt左右的小RNA分子，影响目标mRNAs的翻译和稳定性。miRNAs在真核生物内作为基因表达的负调节子起作用。已知植物miRNAs能在转录后水平上抑制基因表达，主要靠引导mRNA裂解和抑制目标转录物的翻译。此外，发现植物miRNAs也能决定目标染色体位点的甲基化，在转录水平上起作用真核细胞中存在数目庞大的miRNAs可能是基因调控途径中丰富而重要的组分，发挥着调节作用。miRNAs的发现是生命科学的一大突破，它拓展和丰富了以往人们对小分子RNA 的认识，促使生物学家重新反思对细胞进化的理解和认知。miRNA与RNA沉默有关，理解RNA沉默机制可阐明人类疾病。成熟的生化方法和对RNA沉默的作用及机制的其它剖析方法的发展，将对RNA沉默机制提供更多的视点。 真核生物转录后存在复杂的加工 RNA的加工的类型 剪切及剪接：剪切就是剪去部分序列；剪接是指剪切后又将某些片段连接起来。 末端添加核苷酸：加帽、加尾， tRNA的3′-末端添加-CCA。 修饰：在碱基及核糖分子进行化学修饰。 RNA编辑：某些RNA，特别是mRNA自DNA模板上所获得的遗传信息，在转录作用后又发生了变化。 5 mRNA转录后加工主要包括： 原核生物转录生成的初级转录本mRNA不需经过复杂的加工就表现有活性。唯一的加工作用是多顺反子mRNA在RNaseⅢ的催化下，裂解为单独的顺反子。 　　 真核生物转录生成的mRNA要经过较复杂的加工过程。包括：①5′末端加帽 ②3′端加尾③剪接去除内含子并连接外显子 ④RNA编辑 ⑤甲基化修饰。 5.1 5’端加帽 加帽(adding cap)：即在mRNA的5‘-端加上m7GTP的结构。此过程发生在细胞核内，即hnRNA即可进行加帽。 加工过程：首先是在磷酸酶的作用下，将5-端的磷酸基水解，然后再加上鸟苷三磷酸，形成GpppN的结构，再对G进行甲基化。 帽子结构功能： 1.能被核糖体小亚基识别，促使mRNA和核糖体的结合； 2.m7Gppp结构能有效地封闭mRNA 5’末端，以保护mRNA免受5 3．在某些细胞中能够引发病毒RNA（＋）链的复制 5.2 3’端加 在3’ 加尾过程： 内切酶在转录终止点前面的终止信号，一般是AAUAAA后面的10～30个碱基处切断RNA前体，然后在腺苷酸聚合酶的作用下加上一连串的A。 5.3 5’端的甲基化修饰 在 5’端的第1或1和2位的碱基上有时候会发生甲基化，起稳定作用。 真核生物转录后加工除了上述加帽、加尾、甲基化之外，还表现在RNA剪接和RNA编辑两个方面（单独讲解