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HPLC 培训教程 我国药典 收载高 效液相 色谱法项 目和数 量比较 表： 数量 方法 项 目 1985 年版 1990 年 版 1995 年版 2000 年 版 鉴 别 9 34 150 HPLC 法 检 查 12 40 160 含 量 测 定 7 60 117 387 鉴 于 HPLC 应用在 药品 分析中越 来越多 ，因此 每一个药 品分析 人员应 该掌握并 应用 HPLC 。 I ． 概 论 一、液相 色谱理 论发展 简况 色谱法的 分离原 理是： 溶于流动 相 (mobile phase) 中的各组分 经过固 定相 时，由于 与固定 相 (stationary phase) 发生 作用（ 吸附 、分配 、离 子吸引 、排阻 、亲 和）的大小 、强弱 不同 ，在 固定相中 滞留时 间不同 ，从而先 后从固 定相中 流出。又 称为色 层法、 层析法。 色谱法最 早是由 俄国植 物学家茨 维特（ Tswett ） 在 1906 年研究用碳 酸钙 分离植物 色素时 发现的， 色谱法 (Chromatography) 因 之得名 。后来 在此基础 上发展 出纸色 谱法、薄 层色谱 法、 气相色谱 法、液 相色谱 法。 液相色谱 法开始 阶段是 用大直径 的玻璃 管柱在 室温和常 压下用 液位差 输送流动 相，称 为 经典液相 色谱法 ，此方 法 柱效低、 时间长 （ 常有几 个小时） 。高效液 相色谱 法 (High performance Liquid Chromatography ， HPLC) 是在 经典液 相色 谱 法的基础 上， 于 60 年代 后期引入 了气相 色 谱理论而 迅速发 展起来 的。它与 经典液 相色谱 法的区别 是填料 颗粒小 而均匀， 小颗粒 具有高 柱效，但 会引起 高阻力 ，需用高 压输送 流动相 ，故又称 高压液 相色谱 法 (High Pressure Liquid Chromatography ， HPLC) 。又因分 析速度 快而称 为高速液 相色谱 法 (High Speed Liquid Chromatography ， HSLP) 。也称现 代液相 色谱。 二 、 HPLC 的 特点 和 优点 HPLC 有以下 特点： 高 压 — 压 力可 达 150~300Kg/cm2 。色 谱柱每 米降 压为 75 Kg/cm2 以 上。 高 速 — 流 速为 ~ ml/min 。 高 效 — 可 达 5000 塔板每 米。在一 根柱中 同时分 离成份可 达 100 种 。 高 灵敏 度 — 紫外 检测器 灵 敏度可达 。同时 消耗样 品少。 HPLC 与经典 液相色 谱相 比有以下 优点： 速 度快 — 通常分 析一个 样 品在 15~30 min ，有些 样 品甚至 在 5 min 内即可 完 成。 分 辨率 高 — 可选 择固定 相 和流动相 以达到 最佳分 离效果。 灵 敏度 高 — 紫外 检测器 可 达，荧光 和电化 学检测 器可达。 柱子可反 复使用 — 用一 根 色谱柱可 分离不 同的化 合物。 样品量少 ，容易 回收 — 样 品经过色 谱柱后 不被破 坏，可以 收集单 一组分 或做制备 。 三、色谱 法分类 按两相的 物理状 态可分 为：气相 色谱法 (GC) 和 液相色谱 法 (LC) 。气 相色 谱法适用 于分离 挥发性化 合物。 GC 根据 固定相不 同又可 分为气 固色谱法 (GSC) 和 气液色 谱法 (GLC) ， 其中以 GLC 应 用最广 。液相 色 谱法适用 于分离 低挥发 性或非挥 发性、热稳定 性 差的物质 。 LC 同样 可 分为液固 色谱法 (LSC) 和液液色谱 法 (LLC) 。此 外 还有超临 界流体 色谱法 (SFC) ，它 以超临 界流 体（界于 气体和 液体 之 间的一种 物相） 为流动 相（常 用 CO2 ） ，因 其 扩散系数 大，能 很快达 到平衡， 故分析 时间短 ，特别适 用于手 性化合 物的拆分 。 按原理分 为吸附 色谱法 (AC) 、分 配色谱 法 (DC) 、离子交换 色谱法 (IEC) 、排阻色谱 法 (EC ， 又称分子 筛、凝 胶过滤 (GFC) 、 凝胶渗 透色谱 法 (GPC ）和亲和 色谱 法。 ( 此外还有 电泳。 ) 按操作形 式可分 为纸色 谱法 (PC) 、薄层 色谱法 (TLC)