丛枝菌根侵染率研究.pdfVIP

。 丛枝菌根研究方法 一、检测孢子含量的方法 A 湿筛倾注法 1. 称取一定重量的土壤样品（最好是取自 15cm 表层植物根系附近的土壤） ，放在容器内用 水浸泡 20-30min ，使土壤松散。如果土壤粘性很大，也可加入各种土壤分散剂。 2. 选用一套洁净的具有孔径为 0.5-0.034mm 的土壤筛，依次重叠起来。最底层用一物体垫 着（如培养皿、木块等物） ，使筛面稍微倾斜。 3. 用玻璃棒搅动浸泡的水溶液，停置几秒钟后，使大的石砾和杂物沉淀下去，即将悬浮的 土壤溶液慢慢地倒在最上一层孔径最大的土壤筛上。 倾倒时，最好集中倒在筛面的一个点上， 不要使整个筛面都沾有土壤溶液。 4. 用清水依次轻轻冲洗停留在筛面上的筛出物，以免在上层粗筛面的剩留物中夹藏有 VA 菌根真菌孢子。 5. 用洗瓶将停留在筛面上的筛出物轻轻冲洗到一个清洁的培养皿里面，再将滤液通过细筛 并用水冲洗。在冲下来的筛出物中，除有许多细的沙砾和杂质外，就含有 VA 菌根真菌的不 同直径的孢子。 6. 将含有筛出物的培养皿放在双目实体解剖显微镜下观察。 B 蔗糖离心法 1. 称取 10 g 菌剂，置入大烧杯中加 500 ml 水，搅拌，静置 10 s 。 2. 先后过 80 目分样筛、 400 目分样筛， 将 400 目筛子上的残余物用药匙转入 50ml 离心管 中，后用清水冲洗筛子， 将残余物全部转入离心管中， 配平， 3000 转/min 离心 10 min 。（注 分样筛最好直径为 12 cm 左右，便于下面放置烧杯过筛） 3. 去掉上清液，在离心管中加入预先配制好的质量分数为 50%的蔗糖溶液，玻璃棒搅匀， 配平， 3000 转/min 离心 10 min （注意离心前离心管壁上不能有残余物） 。 4. 将 400 目筛子呈一斜面放置， 离心后的蔗糖溶液过筛子的下侧， 用水将筛子上的残留物 轻轻洗入划线培养皿中。 （注意水不能加太多以防影响检测，培养皿划线便于统计） 。 5. 解剖镜镜检统计培养皿中的孢子数目，计算出菌剂中的孢子含量。 注：溶于蔗糖溶液中的孢子仍可进行接种。 A. GerdemannJ W, Nicolson T H,1963. Spores of mycorrhizal endogone species extracted from soil by wet sieving and decanting. Transactions of the British Mycological Society, 46: 235-244 B . 刘润进，李晓林． 2000 ．丛枝菌根及其应用．北京：科学出版社： 190-194 二、检测菌根侵染率的方法（曲利苯蓝染色改良法） Phillips J M ， Hayman D S ， 1970. Improved procedures for clearing and staining parasitic and vesicular-arbuscular mycorrhizal fungi for rapid assessment of infection. Transactions of the British Mycological Society, 55: 158~161 挑根—碱液软化—酸化—染色—脱色—制片、镜检 1. 将洗净的粗细合适的根系剪成 1 cm 左右的根段至于三角瓶中。 2. 加入 10% KOH在 90℃的水浴锅中染色 45~60 min( 去除细胞质，便于染色。一般幼根 精选资料，欢迎下载 。 需要时间较短约 0.5 h ，老根需要时间长约