基因工程综合分析题.docxVIP

精品文档就在这里 ------------- 各类专业好文档，值得你下载，教育，管理，论文，制度，方案手册，应有尽有 -------------- ------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------ -- 综合题 基因工程综合分析题 1、种子在储藏过程中发生了某种变化，使得长成的水稻很容易被一种病原 菌感染。据推测可能是某一化学诱导的突变导致的一个具有抗菌功能的关键酶丢 失。请设计一个实验验证这种推测是否正确， 如何使种了重新获得对这种病的抗 性？ 1、答： 将敏感植株与抗性植株杂交后观察其后代的分离模式， 判断功能的缺失与显性是否有关。通过 mRN 差异显示分析可鉴定敏感植侏与抗性植株基因组之间的表达差异。将获得的差示 cDNA 插入根癌农杆菌的 Ti 质粒，通过转化导入敏感 植株中。这样即可通过反式互补获得目的的基因克隆。 该基因可以作为分子探针，通过杂交分离出野生型和突变型的基因座， 由此鉴定突变体的特性， 最终可以通过“基因治疗”的方式恢复抗性。 2、一个人类疾病基因定位在 7 号染色体一段 140kb 的区域内，并已分离到此染色体区段的克隆， 但是并不知道该基因定位在此区域的哪一位置。 可用什么方法找到该基因？ 2、答： 140Kb 的克隆片段分成一系更更小的片段，以每一个片段作为探针对其他哺乳动物的 DNA 进行动物印迹实验，种间保守的片段将出现信号；这些片段可能编码外显子。 用外显子片段作为 Southern 印迹实验的探针来检测带病病人 DNA ，通常，遗传性疾病都是因为重要基因内的 DNA 发生了变化所致。如果病 人的 DNA 与对照 DNA 的某一片段有着不同的杂交类型，那么这一片段很可能 与疾病有关。从病人和正常对照组中分离 RNA ，用这一片段作为探针进行 Northern 杂交。如果病人和对照组的 RNA 的总量不同，则这一片段很可能包含 致病的基因。 3、如何以大肠菌质粒 DNA 为载体克隆一个编码动物激素的基因，并使之 在大肠杆菌中进行表达？简要说明实验中可能遇到的问题及可能的解决办法。 3、答： 要使动物中编码激素的基因在大肠杆菌中表达，通常遇到的问题有： --------------------------------------------------------- 精品 文档 --------------------------------------------------------------------- 精品文档就在这里 ------------- 各类专业好文档，值得你下载，教育，管理，论文，制度，方案手册，应有尽有 -------------- ------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------ -- （1）细菌的 RNA 聚合酶不能识别真核生物的启动。 （2）大多数真核基因有内含子， 这些内含子在转录后从前体 mRNA 中被切除而形成熟 Mrna。细菌细胞没有必要的机制来去除内含子。 （3）有些真核生物的蛋白质是通过前体分子加工而来的，例如胰岛素就是通过加工去除前体分子内部的 33 个氨基酸残基而来，剩下的两段肽链分别形成胰岛素的 α、β 链。 （4）产生的真核生物的蛋白质产物可以被细菌的蛋白酶所识别和降解。 针对上述可能出现的问题，建议在克隆的过程中采取以下措施： ①应该将激素的编序列置于含有核糖体结合位点和起始密码子 ATG 的细菌强启动子的附近（含有这种序列的载体称表达载体） 。 ②可以以激素的 mRNA 为模板用反转录酶合成激素的基因。这种 DNA 不含内含子可插入到载体中进行克隆。 此外，如果蛋白质序列短则可通过化学合成得到该基因。合成的基因应含起码密码 ATC、通过该激素蛋白的氨基酸序列推测而来的编码序列，以及 1－2 个终止密码： ATC――――编码序列―――― TGA TAG 现在，这个合成基因可被插入载体中。 ③有时加工过程可以在离体条件下进行。 如果加工有因难，可以用合成基因， 从而免除加工过程。 ④选用合适的突变型宿主从而防止蛋白酶水解。 如果用酵母作为宿主上述许 多问都可以较容易地解决， 尤其是现在有既能在大肠杆菌中又能在酵母中复制的 穿梭质粒载体。 说明： 1）ATG、 TAG 和 TGA 是对应 mR