六鉴定菌株的统一标准操作作业规程.docVIP

16SrDNA判定菌株标准操作规程 适用范围 本标准要求了经过特定引物对细菌16SrDNA片段进行PCR扩增，然后对扩增片段进行序列分析比对，快速取得细菌种属信息操作规程。 本标准适适用于未知细菌快速种属分析，和为细菌生化判定提供指导信息。 方法和原理 16SrDNA判定是指用利用细菌16SrDNA序列测序方法对细菌进行种属判定。包含细菌基因组DNA提取、16SrDNA特异引物PCR扩增、扩增产物纯化、DNA测序、序列比对等步骤。是一个快速取得细菌种属信息方法。 细菌rRNA（核糖体RNA）按沉降系数分为3种，分别为5S、16S和23S rRNA。16S rDNA是细菌染色体上编码16S rRNA相对应DNA序列。16S rDNA因为大小适中，约1.5Kb左右，既能表现不一样菌属之间差异，又能利用测序技术较轻易地得到其序列，故被细菌学家和分类学家接收。 在?16S rRNA?分子中，可变区序列因细菌不一样而异，恒定区序列基础保守，所以可利用恒定区序列设计引物，将16S rDNA片段扩增出来，利用可变区序列差异来对不一样菌属、菌种细菌进行分类判定。 16SrDNA序列前500bp序列改变较大，包含有丰富细菌种属特异性信息，所以对于绝大多数菌株来说，只需要第一对引物测前500bp序列即可判别出细菌菌属。针对科学论文发表或是前500bp无法判别情况，需要进行16SrDNA全序列扩增和测序