PEI转染试剂的Protocol[推荐].pdfVIP

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2020-11-10 发布于福建
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PEI转染试剂的Protocol[推荐].pdf

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PEI 转染Protocol 1. 转染前一天（24h 左右）胰酶消化细胞并计数，细胞铺板，使其在转染时汇合度为 70~90% 。 2. 转染前1h，将细胞培养基更换为Opti-MEM 或者DMEM 基础培养基（若使用Opti- MEM，PEI 转染效果更佳）。 3. 用一定体积的Opti-MEM 稀释质粒，小心混匀，记为A 液；用相等体积的Opti-MEM 稀释PEI，小心混匀，记为B 液（质粒：PEI=1：2，W/W) ，室温静止5min 。 4. B 液缓慢加到A 液中并混匀，最好使用旋涡振荡器边加边震荡。然后室温放置 20min。 5. DNA-PEI 混合液缓慢加入到细胞培养基中，轻轻混匀。 6. 转染4h 后更换为完全培养基。 2 培养皿面积(cm ) 转染DNA 量稀释DNA/PEI 的培养基体积（ug）（ul） 96 孔板 0.32 0.2 25 48 孔板 1.1 0.5 35 24 孔板 1.9 0.8 50 12 孔板 3.5 1.6 100 6 孔板 9.6 4 250 6cm 平板 21.5 8 500 10cm 平板 56.7 16 1000 15cm 平板 147 32 2000