植物组织培养实验基本步骤。。.pdfVIP

植物组织培养实验基本步骤 一、母液的配置 1、MS 大量元素母液的配制 将大量元素配制成10 倍的母液，使用时再稀释10 倍。 按照配方表中用量依次分别称取扩大 10 倍的：NH4NO3 8.250g 、KNO3 9.500g 、KH2PO4 0.850g 、MgSO4 ·7H2O 1.850g 、CaCl2 ·2H2O 2.20g，所有药品称取完毕后用蒸 馏水逐个溶解，待全部溶解后，最后定容至500ml，转入500ml 细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、放大倍数、配制 日期、配制人姓名，置于4℃冰箱中保存备用。 2、MS 微量元素母液的配制 将微量元素配制成100 倍的母液，使用时再稀释100 倍。 按照配方表中用量分别依次称取：MnSO4 ·4H2O 1.1150g 、 ZnSO4 ·7H2O 0.4300g 、H3BO3 0.3100g 、KI 0.0415g 、 CuSO4 ·5H2O 0.00125g、 CoCl2 ·6H2O 0.00125g，用蒸 馏水逐个溶解，待全部溶解后，用容量瓶定容至 500ml，转 入500ml 细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、放大倍 数、配制日期、配制人姓名，置于4℃冰箱中保存备用。 3、MS 铁盐母液配制 将铁盐配制成100 倍的母液，使用时再稀释100 倍。按 照配方表中用量分别称取扩大 100 倍的：称 FeSO4 ·7H2O 1 1.390g 和 Na2 ·EDTA 1.865g ，把 FeSO4 ·7H2O 和 Na2 ·EDTA ·2H2O 分别置于200ml 蒸馏水中，加热并不断搅 拌使之溶解（磁力搅拌器，边加热，边搅拌）。保持加热， 把FeSO4 溶液慢慢倒入Na2 ·EDTA 溶液中并不断搅拌，接近 沸腾时停止加热，待溶液冷却后加蒸馏水到最终容积500ml， 置于棕色细口瓶中，用力振荡 1～2min，贴上标签，注明母 液名称、放大倍数、配制日期、配制人姓名。在室温下避光 保存一段时间令其充分反应后，再置于4℃冰箱中保存备用。 4、MS 有机化合物母液的配制 将有机化合物配制成 100 倍的母液，使用时再稀释 100 倍。按照配方表中用量分别称取扩大 100 倍的：肌醇 5.000g 、维生素 B1 0.025g 、烟酸 0.025g 、甘氨酸 0.100g 、维生素B6 0.005g 、蔗糖 15.000g ，用蒸馏水 依次溶解并定容至500ml 后，转入500ml 细口试剂瓶中，贴 上标签，注明母液名称、配制日期、配制人姓名，置于 4℃ 冰箱中保存备用。 二、植物激素的配置 常见激素：二氯苯氧乙酸（2，4－D）、萘乙酸（NAA）、吲 哚乙酸（IAA）、吲哚－3－丁酸（IBA）、激动素（6-糠氨 基嘌呤、 KT）、6－苄氨基嘌呤（6－BA）、赤霉素（GA3）、 1、生长素类： （1）、生长素类在组织培养中的主要作用是：诱导细胞的 2 分裂和根的分化，诱导愈伤组织 （2）、常见生长素：二氯苯氧乙酸（2，4－D）、萘乙酸（NAA）、 吲哚乙酸（IAA）、吲哚－3－丁酸（IBA）。NAA、IAA、IBA 被广泛用于生根，2，4－D 有利于愈伤组织的诱导和生长。 IAA 容易光解，注意用棕色试剂瓶保存，保存时间不要太久。 （3）、溶解方法：称25mg 吲哚乙酸（IAA），用少量1mol/L NaOH 或95％酒精预溶解，再加蒸馏水定容至25ml，摇匀。 （4）、保存：配成一定浓度后，冰箱冷藏保存 2、细胞分裂素 组织培养中，细胞分裂素主要促进细胞分裂和由愈伤组 织上或器官上分化不定芽。细胞分裂素常常与生长素相互配 合，用以调节细胞分裂，细胞伸长，细胞分化和器官形成。 （1）、常用的细胞分裂素有： 6－苄氨基嘌呤（6－BA）、 激动素 （6-糠氨基嘌呤、 KT）、玉米素（ZT）、噻二唑苯 基脲（TDZ ） （2）、溶解方法：称 25mg 6－苄氨基嘌呤（6－BA），用 少量（1ml）1mol/L HCL