秦 12级形态学综合实验.pptVIP

第一幕：吴某，男，70岁，上海嘉定人。间歇性腹泻多年，无脓血，偶尔服用“黄连素”后好转或自行好转。近日，外出就餐后腹泻加重，出现黏液血便。平日无吸烟和酗酒史，无生食习惯 一、讨论： 能够引起腹泻的微生物有哪些？ 如何进行相关微生物学检查？ 肠道杆菌（G—）革兰染色对于肠道杆菌检查的意义？ 常用酸碱指示剂： 3、吲哚（靛基质）试验 有些细菌分解色氨酸生成吲哚（靛基质），与加入的二甲基氨基苯甲醛反应生成玫瑰吲哚呈玫瑰红色为阳性；黄色为阴性 肠道杆菌生化反应表 SS琼脂平板 SS培养基 肠道非致病菌分解乳糖产酸，菌落呈红色，较大 肠道致病菌不分解乳糖，呈半透明的淡黄色或白色菌落，较小 双糖铁培养基 双糖铁培养基 结果判断： 　 三、实验操作一、划线分离 实验器材： SS平板：1块/人 标记笔、接种环、酒精灯、培养箱 手套（1副/人）、口罩1个/人 阳性对照—— 痢疾杆菌平板 1块/桌 阴性对照—— 大肠杆菌平板 1块/桌 待检标本—— 未知细菌菌液 1ml只/桌 实验方法 分组：3人一组（阳性对照、阴性对照、待检标本） 划线分离方法（3区划线法）： 取平板上的菌苔或菌液1环（注意无菌操作！）→ 持接种环来回连续划线（约1/3），此为1区→ 将平板转90度，继续连续划线（约1/3），只有开始1-2条线通过1 区，此为2区→ 再将平板转动90度，按划2区的方法划出3区→ 标记笔写上菌名、操作者、日期，倒放，置37度孵箱培养18-24h，第二天观察结果 注意事项 1. 为保障实验安全，为每位学生提供一付手套和一个口罩，下课时请扔入垃圾箱 2. 菌液取菌前要摇匀，让沉淀的细菌悬起来 3. 取平板上菌苔（对照）时各区之间要过火烧灼（否则不能形成单个菌落），取菌液时各区之间不要烧 4. 平板要倒置放入孵箱 5. 通知：第二天看实验结果 实验操作二、玻片凝集 抗痢疾血清 (1:4稀释)：1只/桌 玻片： 1张/人 分组：2人一组 ，一人做阳性对照和待测标本， 一人做阴性对照和待测标本 操作： 将玻片分为A、B两区域 各加血清1滴，形成液滴 各加标本1环（少量），混匀 轻摇玻片，1～2分钟后观察结果， 结果判断：出现乳白色凝集块属阳性反应 注意事项： 1. 先加血清再加细菌，以防细菌污染血清，血清 加1滴即可，不要多加 2. 刮取平板中的菌苔时取少量即可，以防取太多，与凝集颗粒混淆 3. 实验完毕玻片扔在后面的玻片缸里 * * 二、肠道杆菌的分离鉴定 ？ 紫 黄 红 红 中性色 紫 黄 溴甲酚紫 黄 红 酸性复红 红 黄 酚红 黄 红 中性红 碱色 酸色 名称 细菌生化反应 1、糖发酵试验 由于细菌各自具有不同的酶系统，故对糖（醇）类的分解能力不尽相同 产酸产气：指示剂变色，小倒管内有气泡 以＋ 表示 产酸： 指示剂变色，以＋表示 不能分解 ：指示剂不变色；以－表示 1.Negative 2. Positive 3. Positive and gas produced 指示剂为溴甲酚紫 十 + － ? 指示剂为酚红 － － 2、硫化氢试验 硫化氢遇铅盐或铁盐形成黑色硫化铅或硫化亚铁沉淀物 positive negative 4、尿素酶试验 有些细菌具有尿素酶，能分解尿素形成大量的氨，使培养基pH上升，而变成碱性，使含有酚红指示剂的培养基呈红色为阳性；不变色为阴性 +/- +/- - - - - +/ + 变形 - - +/- - +/ + +/ + - +/ + 伤寒 - - - - - - 痢疾 - - - 大肠 靛 尿素 H2S 蔗 甘 麦 乳 葡 肠道杆菌的分离鉴定 增菌培养 SS琼脂平板 双糖铁培养基初步鉴定 其他生化反应鉴定 血清学鉴定 有菌 可疑（致病菌）菌落 血、骨髓、尿 粪便 胆盐 枸橼酸盐 煌绿 乳糖 蛋白胨 中性红 抑制杂菌生长 被非致病菌分解产酸 被致病菌分解产碱 酸：红 碱：黄 上层 （固体） 下层 （半固体） 乳糖 硫酸亚铁 酚红 葡萄糖 + +/ + 黄 +/- - 红 变形 + +/ + 黄 +/- - 红 伤寒 - + 黄 - - 红 痢疾 + + 黄 - + 黄 大肠 动力 葡萄糖 H2S 乳糖 下层 上层 肠道杆菌 *