PDX模型的建立、分析和应用课件.ppt

PDX模型的应用 建立PDX模型进行生物标记物的开发来实验个性化治疗 Tentler, J. J. et al. Nat. Rev. Clin. Oncol. (2012) * PDX模型的应用 分子标记物(Biomarker)的开发流程 * PDX模型的应用 Tentler, J. J. et al. Nat. Rev. Clin. Oncol. (2012) * 谢谢！ * 对多种状态下病人来源的肿瘤：例如使用已经进行过前期治疗的病人的肿瘤样本进行移植研究，可以进一步辅助临床研究 NOD-SCID是之前最常用的品系，但越来越多研究者在使用NSG品系，因为免疫缺陷水平最高 NOD-SCID是之前最常用的品系，但越来越多研究者在使用NSG品系，因为免疫缺陷水平最高 示例图为传统的培养肿瘤细胞后接种，PDX肿瘤组织的接种与此类似，常规接种部位为背部皮下，手术开创后接种肿瘤组织块 常规的肿瘤组织皮下接种需要用手术剪开创，接种肿瘤组织后用外科创口粘合剂进行创口修复； 使用套针进行移植的话可以直接进行，创口小，不需要进行后续的处理。 冻存和复苏的基本操作与细胞一致 RNA表达水平一般都是用基因芯片进行分析，也需要生物信息学平台进行数据分析 精选 精选 人源肿瘤异种移植(PDX)模型的建立、分析和应用 Fei Zhou * 肿瘤研究模型 多样化的肿瘤研究模型 病人肿瘤组织/原代肿瘤细胞 永生化的肿瘤细胞系 2D和3D的细胞生物学实验方法（增殖/存活） 来源于肿瘤细胞系的移植模型 来源于病人肿瘤组织的移植(PDX)模型 Patient Derived Tumor Xenograft 新 * 传统模型：肿瘤细胞系 可以很方便的在体外进行培养和实验 缺点： 在培养和传代过程中进行“筛选”，肿瘤细胞逐渐适应体外培养环境而失去原有特性 缺乏肿瘤相关的生长环境 支持性的非肿瘤基质 血液细胞，免疫系统的交互 其他肿瘤微环境因子 * 肿瘤研究模型 使用传统的肿瘤研究模型没能取得临床上的成功！ 肿瘤的多样化和异质性 研究模型与临床病人缺乏相关性 * PDX模型技术流程图 Modified Fig from Oncodesign Biotechnology * 为什么使用PDX模型？ 优势 没有体外培养的过程对肿瘤进行“筛选” 能搞保持肿瘤原有特性和异质性 在传代过程中能够保持分子生物学水平的稳定 保留了原有的非肿瘤基质和微环境 可以对多种状态下病人来源的肿瘤进行研究 PDX模型和肿瘤病人有更好的对应性！ * 使用PDX模型 劣势 仍然不能模拟肿瘤与免疫系统的交互 可以在NSG小鼠模型中部分重建人源免疫系统 在传代过程中模型的非肿瘤基质会被鼠源的基质逐渐取代 使用较低代数的PDX模型进行研究 需要相对便捷的临床肿瘤样本来源 技术水平上有挑战性 移植 + 分析（包括生物信息学平台） 建立和维持的成本较高 相对的建成之后的使用价值也非常高 * PDX模型的建立 PDX模型的分析 PDX模型的应用 * PDX模型的建立 关键点 肿瘤宿主 肿瘤接种 肿瘤的冻存和复苏 * 宿主品系 小鼠品系 免疫缺陷 Nude T淋巴细胞严重缺失 SCID Severe Combined Immunodeficiency T淋巴细胞和B淋巴细胞缺失 NOD-SCID Non-obese Diabetic SCID 与普通SCID相比NK细胞活性低，更低的免疫恢复几率 NSG NOD-SCID-IL2Rγ-/- 缺失T淋巴细胞，B淋巴细胞和NK细胞 * 宿主品系 目前并没有针对不同品系宿主的完整比较 移植瘤生长时间 接种成功率 移植瘤遗传学特性 移植瘤组织学特性 移植瘤传代的稳定性 模型建立情况与肿瘤类型相关 荷瘤小鼠的饲养 设施要求（常规为SPF级IVC饲养） 完善的IACUC政策 * 肿瘤接种 皮下接种 Norman E. Sharpless and Ronald A. DePinho, et al. Nature Review Drug Discovery 2006 * 肿瘤接种 使用套针(Trochar)进行皮下肿瘤接种 Xiaomei Zhang, et al. Current Protocols in Mouse Biology 2013 * 肿瘤接种 原位接种 常用途径：肾包膜下接种(Sub-Renal Capsule, SRC) Peter Eirew, et al. Nature Protocols 2010 * 肿瘤组织的冻存和复苏 冻存液 胎牛血清 + 10% DMSO 保存条件 -80oC：6周 液氮：长期保存 从冻存条件下复苏 37oC水浴快速解冻 * * 肿瘤组织的冻存和复苏 通过冻存和复苏可以： 在获得患者知情同意书之前保存样本 保