核酸分离和纯化doc资料.pptVIP

核酸分离和纯化;前言;核酸的分类： DNA 核内染色体 DNA。 核外也有少量DNA，如线粒体DNA，叶绿体DNA。 质粒DNA。 RNA 存在于细胞质中，如mRNA, rRNA, tRNA等。 除上述DNA，RNA外，还有非细胞形式存在的病毒和噬菌体，其或只含DNA，或只含有RNA。;主要内容;1. 核酸分离与纯化的原则及要求;1.2 核酸分离与纯化的要求 (1) 为保证核酸的完整性， （防止降解），在实验中应注意： 尽量简化步骤，缩短提取时间，减少各种有害因素对核酸的破坏。 减少化学因素对核酸的降解，pH4-10。 ;防止核酸的生物降解（细胞内或外的各种核酸酶水解）。 所用器械和一些试剂需高压灭菌，提取缓冲液中需加核酸酶抑制剂。操作温度为0~4℃。 DNA酶需要金属离子Mg2+、Ca2+的激活，因此使用金属离子螯合剂，如EDTA或柠檬酸盐等；阴离子表面活性剂SDS。 RNA酶分布广泛，极易污染样品，而且耐高温、耐酸碱、???易失活，生物降解是RNA提取过程中的主要危害因素。0.1%DEPC浸泡，器械180℃干烤8h。 ;减少物理因素对核酸的降解，主要是机械剪切力，其次是高温。 机械剪切力包括强力高速的振荡、突然暴露于低渗液、样品反复冻融等。 高温，如长时间的煮沸。 ;(2) 核酸纯度的要求： 非核酸生物大分子的污染降低到最低程度，如蛋白质、多糖和脂类分子； 排