免疫学检验 免疫细胞检测技术 24 第二十三章 免疫细胞及其功能检验技术.pptVIP

* * * * * * * 淋巴细胞数量及功能检测 CTL介导的细胞毒试验 51Cr释放法 淋巴细胞（CTL） + 含51Cr 的肿瘤细胞 肿瘤细胞破坏 51Cr 释放 测定γ射线 淋巴细胞数量及功能检测 MHC-抗原肽四聚体技术 原理：根据T细胞活化的双识别原理，用生物工程技术将MHC分子在体外组装，并结合抗原表位肽，形成抗原肽-MHC分子复合物，结合流式细胞仪定量检测抗原特异性T细胞。 T 淋巴细胞数量及功能检测 MHC-肽四聚体技术 抗原肽 α重链 生物素 亲和素 Β2微球蛋白 荧光素PE 淋巴细胞数量及功能检测 MHC/抗原肽四聚体通过TCR与特异性T细胞结合 T Cell Target cell 淋巴细胞数量及功能检测 淋巴细胞内细胞因子检测 实验原理: 用刺激剂体外激活淋巴细胞，用蛋白转运抑制剂如莫能霉素阻止细胞因子分泌到细胞外，细胞内蛋白质转运方式被打乱，引起细胞因子向高尔基体积聚，用流式细胞仪测定淋巴细胞内的细胞因子种类，确定Th1/ Th2细胞的百分率。 淋巴细胞数量及功能检测 Thl和Th2分泌的细胞因子 分泌的细胞因子 Thl Th2 IL-2 ++ - IFN-γ ++ - TNF-β ++ ++ IL-3 + ++ GM-CSF + ++ TNF-α - ++ IL-4 - ++ IL-5 - ++ IL-6 - ++ IL-10 - ++ 淋巴细胞数量及功能检测 二、B细胞数量及功能检测 （一） B细胞数量检测 根据B细胞表面标志进行检测： mIg的检测：免疫荧光、免疫组化。 CD分子的检测： 检测CD19、CD20、CD21、CD22、CD29以及CD5等。 小鼠红细胞受体的检测：花环试验。 淋巴细胞数量及功能检测 （二） B细胞功能检测 B细胞增殖试验：3H-TdR掺入法、MTT法。 （刺激物：小鼠用LPS；人用SPA的金黄色葡萄球菌菌体或抗IgM抗体） B细胞抗体产生能力检测：溶血空斑试验、ELISPOT。 淋巴细胞数量及功能检测 经典溶血空斑试验 SRBC致敏的B细胞与SRBC在凝胶介质中混匀； 1 抗体形成细胞( Antibody forming cell, AFC )周围的SRBC与AFC产生的抗体结合而被致敏； 2 加入豚鼠新鲜补体，致敏SRBC激活补体而溶解，在AFC周围出现肉眼可见的溶血空斑； 3 计算溶血空斑的数目。 4 淋巴细胞数量及功能检测 溶血空斑试验 淋巴细胞数量及功能检测 酶联免疫斑点试验 抗体产生 B细胞 抗原包被 酶联抗抗体 凝胶底物 显色 可在单细胞水平上检测B产生抗体和T细胞分泌细胞因子。 淋巴细胞数量及功能检测 三、NK细胞数量及功能检测 （一） NK细胞数量检测 根据NK细胞表面标志进行检测： CD分子的检测： 检测CD3、CD56、CD16等（CD3-CD56+CD16+）。 淋巴细胞数量及功能检测 （二） NK细胞功能检测 NK 靶细胞 检测荧光强度、cpm等 K562细胞为人NK细胞杀伤功能检测的常用靶细胞。 形态学法； 酶释法：LDH释放法； 荧光法：时间分辨荧光免疫分析法； 放射性核素释放法：51Cr释放法、1