核酸分子杂交与应用描述知识分享.pptVIP

核酸分子杂交与应用描述;Date;核酸分子杂交的基本原理与分类;Date;变性温度(Tm)：核酸分子热变性时，从开始变性到变性结束，是在一个很窄的温度范围内进行的，当变性进行到核酸分子解链一半时的温度，称变性温度，也称融解温度。;Date;影响变性的因素：;影响变性的因素：;影响变性的因素：;复性：变性核酸分子在合适的条件下重新形成双螺旋结构的过程称复性。热变性的DNA溶液在低于Tm值25 oC的温度下维持相当长的一段时间，则可使之恢复到天然的双链结构状态。复性的速度受以下因素影响：;3、温度 温度过高，有利于DNA变性而不利于复性；;分子杂交技术就是利用了核酸分子的变性与复性原理，使变性的核酸分子与检测核酸分子在碱基互补的条件下形成杂交双螺旋的过程。;核酸分子杂交分类：;液相杂交(solution hybridization)：是一种比较原始的分子杂交技术。待测分子与探针在杂交液中完成反应，利用层析方法将杂交分子与末杂交分子分开后用液闪仪进行计数或利用紫外吸收特性变化分析杂交结果的分子杂交类型。液相杂交又分为：RNA酶保护分析法、核酸酶S1保护分析法。;RNA酶保护分析法(RPA)：利用RNase A和RNase T1能专一性降解单链RNA而双链RNA受到保护的特点，用体外转录合成的放射性标记的RNA探针与待检mRNA 进行液相杂交，使互补序列RNA探针和待测RNA形成杂交