精选幻灯片沉淀与共沉淀.pptVIP

有机溶剂沉淀的影响因素 ? ① 温度： 多数蛋白质在有机溶剂与水的混合液 中，溶解度随温度降低而下降。值得注意的是大 多数生物大分子如蛋白质、酶和核酸在有机溶剂 中对温度特别敏感，温度稍高就会引起变性，且 有机溶剂与水混合时产生放热反应，因此有机溶 剂必须预先冷至较低温度，操作要在冰盐浴中进 行，加入有机溶剂时必须缓慢且不断搅拌以免局 部过浓。一般规律是温度越低，得到的蛋白质活 性越高。 31 ? ②样品浓度： 低浓度样品要使用比例更大的有机溶 剂进行沉淀，且样品的损失较大，即回收率低，具 有生物活性的样品易产生稀释变性。但对于低浓度 的样品，杂蛋白与样品共沉淀的作用小，有利于提 高分离效果。 ? 反之，对于高浓度的样品，可以节省有机溶剂，减 少变性的危险，但杂蛋白的共沉淀作用大，分离效 果下降。 32 ? ③ pH 值 ： 有机溶剂沉淀适宜的 pH 值，要 选择在样品稳定的 pH 值范围内，而且尽可能 选择样品溶解度最低的 pH 值，通常是选在等 电点附近，从而提高此沉淀法的分辨能力。 33