果蝇翅形、刚毛、眼色三对性状的三点测交与遗传作图.docxVIP

PAGE 1 果蝇翅形、刚毛、眼色三对性状的三点测交与遗传作图 摘要：基因的连锁与互换定律是遗传学的第三大基本定律，通过三点测交实验我们可以很好的反映该定律。本实验以黑腹果蝇（Drosophila melanogaster）作为实验材料，以果蝇X染色体上三对非等位基因的交换行为来验证基因在染色体上呈直线排列。实验中我们以野生型（长翅，直刚毛和红眼）和三隐性（短翅，卷刚毛和白眼）果蝇为亲本材料进行杂交，在F2代中观察到8种表型。同时，通过计算三点测交F2代8种表型的相对频率，我们可以计算出重组值，进而确定出三基因的排列顺序。从而最终实现了这三对基因遗传图的制作和基因定位。 关键词：果蝇；三点测交；遗传作图；基因定位 引言 黑腹果蝇（Drosophila melanogaster）属双翅目昆虫，具有完全变态。作为实验材料具有如下优点：①生长迅速，周期短，在25℃条件下，10~12d可完成一个世代；②繁殖力较强，每只雌果蝇可以产卵400~500枚，因而可以在短时间内获得多数子代，有利于做遗传学统计分析；③饲料简便易得，容易饲养，成本低，实验所需空间较小，条件简单，容易管理；④突变性状多达400个以上，并且多数是形态变异，便于观察和统计分析；⑤染色体数目少，突变基因容易在染色体上定位。利用黑腹果蝇可以很好的用来进行基因的连锁与互换定律的验证。其中所用到的的性状为翅形（长翅、短翅）、刚毛类型（直刚毛、卷刚毛）和眼色类型（红眼、白眼）三对性状。这三对非等位基因都位于X染色体上。通过观察F2代表型，可以很好的判断三个基因的连锁关系和遗传图距[1]。 4.1 实验目的 1. 学习和掌握用“三点测交”进行基因定位的方法。 2. 了解绘制遗传学图的原理和方法。 3. 加深对重组值、遗传学图、双交换值、并发率和干涉等概念的理解。 4.2 实验原理 位于不同染色体上的两对基因，它们所决定的两对相对性状在F2是自由组合的。而位于同一染色体上的基因则是连锁的，同源染色体的基因之间可以发生交换。使子代出现一定数量的重组型，重组型出现的多少反映出基因间发生交换的频率的高低。根据基因在染色体直线排列的原理，基因间距离越远，期间发生交换的可能性越大，即交换频率越高；反之则小，交换率就低。因此交换值的大小就可以用来表示基因间距离的长短。但交换值无法直接测定，而只有通过基因之间的重组来估计所发生交换的频率，所以通过计算重组值的大小，就能反映基因间距离的大小[2]。 基因图距是通过重组值的测定而得到的。如果基因座相距很远，重组率与交换率的值相等，可以根据重组率的大小作为有关基因间的相对距离，把基因顺序地排列在染色体上，绘制出基因图。但在基因间相距较远的情况下，两个基因间往往会发生两次以上的交换，这时如果简单地把重组率看做交换率，就会低估了交换率，图距也会随之缩小，因此需要利用实验数据进行校正，以便正确估计图距。根据这个道理，可以确定一系列基因在染色体上的相对位置。 本实验通过对同一染色体上3个非等位基因的交换行为来验证基因在染色体上呈直线排列。先用野生型果蝇（长翅、直刚毛、红眼）与三隐性果蝇（白眼、短翅、焦刚毛）杂交，制成三因子杂种，再把雌性杂种与三隐性个体测交，在测交后代中由于基因间的交换可得到8种不同的表型，经过数据处理，绘制出遗传学图，这样一次实验便可以测出3个连锁基因在染色体上的距离和顺序，就叫做三点测交或三点试验。 三隐性果蝇（m sn3 w）具有短翅（m 翅长至腹部末端）、卷刚毛（sn3）和白色复眼（w），这3个基因都在X染色体上。 F1的雌蝇表型是野生型，雄蝇是三隐性。得到的测交后代，其中多少个体与原来亲本相同。同时会出现少量与亲本不同的个体，称为重组型,是基因间发生交换的结果。（如图1~2）。 m sn3 w m sn3 w + + + m sn3 w m sn3 w + + + P 野生型♂三隐性♀ 野生型♂ 三隐性♀ F1 三隐性♂三因子杂种♀ 三隐性♂ 三因子杂种♀ 测交后代 图1三点测交的交配方式 图2 三因子杂种中基因发生交换产生的8种不同配子 因为重组值是表示基因间的交换频率，而图距表示基因间的相对距离，通常是由两个邻近的基因图距相加得来的，所以图距往往不等同于重组值。图距可以超过50%，重组值只会逐渐接近而不会超过50%，只有基因相距较近时，图距才和重组值相等[3]。 4.3 实验材料、仪器和试剂 4.3.1 实验材料 黑腹果蝇（Drosophila melanogaster）：18#品系野生型果蝇（+++）红眼、长翅、直刚毛；6#品系三隐性果蝇（m sn3 w）短翅、卷刚毛、白眼